Amplisense hcv fl

Симптоми

За топлите лета в езерата, парковете и площадите, активните глини. Том, perebuivaychi по naturі, varto pourbuvatisya за vlasnu bezpeku, abi.

01.03.2017

тест AmniSure

Купете тест за определяне на изтичане на амниотична течност при бременни Amnishur можете също да в аптеките в Киев:
1. Аптеки "Арника".

08/26/2016

FLOROTSENOZ

Комплексен тест на ново поколение за диагностициране на ВСИЧКИ клинично значими инфекции на урогениталния тракт при жени в репродуктивна възраст.,

Инструкции. "AmpliSens HCV-генотип-FL" AmpliSens

препис

1 инструкции за използване на реагенти комплект за откриване и диференциация на генотипа на хепатит С (HCV) в клинични проби чрез полимеразна верижна реакция (PCR) с откриване хибридизация-флуоресценция в режим "в реално време" "AmpliSens HCV-генотип-FL» AmpliSens Федерална бюджет институция наука "централен научно-изследователски институт по епидемиология", Руската федерация, Москва, улица Novogireevskaya 3а къща

2 СЪДЪРЖАНИЕ СПИСЪК НА АКРОНИМИТЕ. 3 ЦЕЛ. ПРИНЦИП НА МЕТОДА. 3 ФОРМАТИ И ФОРМИ НА ИЗДАВАНЕ НА РЕАКТИВИТЕ. 5 АНАЛИТИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ. 5 ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ. 6 ДОПЪЛНИТЕЛНИ МАТЕРИАЛИ И ОБОРУДВАНЕ. 7 Вземете, транспортиране и съхранение на изпитвания материал. 9 СЪСТАВ АСПЕКТ FRT PCR-RNA екстракция от ИЗСЛЕДВАНИЯ за проби СХЕМА обратно транскрипторна реакция А. Получаване тръби за обратна транскрипция Б. Провеждане на обратна транскрипция реакция на амплификация с откриване в "реално време" от А. Получаване тръби A1 за амплификация. Получаване на епруветки за амплификация с използване на набор от "PCR комплект" реагенти вариант FRT-G А2. Получаване на епруветки за амплифициране, използвайки комплект реагенти "PCR комплект" вариант FRT-G Б. Провеждане откриване амплификация в "реално време" анализ и интерпретация на резултатите срок на годност, транспорт и съхранение допълнение 1. ДОБИВ НА РНК с помощта на набора от реагенти " рибо-Sorb "ПРИЛОЖЕНИЕ 2. РНК екстракция с реагент" рибо-Prep "символите в печатен продукт х (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 2 от 32

3 СЪКРАЩЕНИЯ Следващите съкращения и символи използвани в тези инструкции: ДНК dezoksirubonukleinovaya киселина сДНК комплементарна ДНК РНК рибонуклеинова киселина от обратната транскрипция на ЕКО проба вътрешен контрол ОКО отрицателна контрола PKO положителна контрола К + - положителна контрола PCR К - отрицателна контрола PCR OK - отрицателен PCR контрол добив на полимеразна верижна реакция FBUN централен научно-изследователски институт по епидемиология HCV FRT ЦЕЛ федералния бюджет установен IX Science "Централен научно-изследователски институт за епидемиология" на Федералната служба за надзор на защита на правата на потребителите и благополучието на хората в хепатит С откриването на вируса на флуоресценция в "реално време" Реагенти "AmpliSens на HCV-генотип-FL" е предназначен за откриване и диференциацията на вирусни генотипове хепатит с (HCV) в клинични проби чрез полимеразна верижна реакция (PCR) с откриване хибридизация-флуоресценция в "реално време". Определяне на HCV генотипове 1А, 1В, 2, 3а, 4 се извършва чрез "PCR комплект" вариант FRT-g1-4; определяне на генотипа HCV 1а, 1б, 2, 3а, 4, 5а, 6 се извършва чрез "PCR комплект" вариант FRT-g1-6. Този реагент се препоръчва да се използва след откриване на HCV РНК в пробите с помощта на комплекти, предназначени за едновременно качествено и количествено определяне на HCV РНК (например, "AmpliSens HCV-FL», използвайки откриване gibridizatsionnofluorestsentnuyu, или "HCV-AmpliSens ERH "чрез електрофореза откриване на амплификационни продукти (производство FBUN епидемиология CRI)). ВНИМАНИЕ! резултатите от анализа на PCR се записват в комплекс диагноза болест 1. Принципът на метода 1 В съответствие с Директива на ЕС 98/79 / ЕО. 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 3 от 32

4 се основава на принципа на изпитване на екстракция на РНК от кръвна плазма заедно с рекомбинантен вътрешна контролна проба (ASD), провеждане на РНК обратна транскрипторна реакция и PCR амплификация на кДНК откриване gibridizatsionnofluorestsentnoy в "реално време". За да се избегнат фалшиво-отрицателни резултати в изследването влезли EKR, която ви позволява да контролирате всички етапи на анализ и оценка на въздействието на PCR инхибитори на резултатите от изследването. Определяне на генотип на HCV единична проба се провежда в множество тръби, всяка епруветка в две диференцирани HCV генотип, или един генотип и HCV ЕКО. Комплектът е предназначен за устройства с два или повече канала за откриване на флуоресценция. В таблицата са изброени каналите, чрез които се откриват HCV генотипове за всяка реакционна смес. Реакционната смес 1б / 3a 1а / 2/4 EKR 5а / 6 генотипове 2 канал Откриваеми HCV FAM / Green 1б 1а ASD 5а JOE / Hex / жълто / Cy3 3a е част от "PCR комплект" вариант FRT-g1-6. 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 4 от 32

5 ФОРМАТА и изпускателната KIT реагенти реагент произведени в един формат: Форматът на FRT реагент произведени в 7 форми определен: Форма 1 включва реактивни комплекти "рибо-Sorb" вариант 50 "Реверте-L» вариант 50 "PCR кит" вариант FRT-g1-4. Форма 2 включва реактивни комплекти "рибо-препаративна" вариант 50 "Реверте-L» вариант 50 "PCR комплект" вариант FRT-g1-4. Форма 3 включва набор от реагенти "PCR комплект" опция FRT-g1-4. Форма 4 включва комплекти от реагенти "рибо-Sorb" вариант 50 "Реверте-L» вариант 50 "PCR комплект" вариант FRT-g1-6. Форма 5 включва комплекти от реагенти "рибо-препаративна" вариант 50 "Реверте-L» вариант 50 "PCR комплект" вариант FRT-g1-6. Форма 6 включва набор от реагенти "PCR комплект" опция FRT-g1-6. Форма 7 включва реактивни комплекти в насипно състояние, опаковани за индивидуални реактиви, белязани реагенти върху опаковката на едро. Форма конфигурация 1, 2, 3 са предназначени за определяне на генотипа 1а, 1б, 2, 3а, 4 ° форми на HBV механизъм 4, 5, 6 са предназначени за определяне на генотипа 1а, 1б, 2, 3а, 4, 5а, 6 HCV с образува възел 1, 2, 4, 5 са ​​предназначени да извършват цялостен PTsRissledovaniya включително екстракция на РНК от клиничен материал, провеждане на обратна транскрипция на РНК и PCR амплификация на кДНК откриване gibridizatsionnofluorestsentnoy в "реално време". Форма пълен набор от 3 и 6 се използва за PCR амплификация на кДНК откриване хибридизация-флуоресценция в "реално време". За да се извърши пълен анализ е необходимо да се използва реагент комплекти FBUN производство изследователски институт по епидемиология за екстракция на РНК (реагент комплекти "рибо-Sorb" или "рибо-препаративна"), и транскрипция реакция (комплект реагент "Реверте-L») обратно. пълен Форма 7 е предназначен за промишлени цели, за последващо етикетирането на езика на клиента и пълен набор от комплекта. ВНИМАНИЕ! Използването 7 образува пълен комплект само в съответствие с правилата, одобрени FBUN Централен научно-изследователски институт по епидемиология. Аналитични HARAKTISTIKI 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 5 от 32

6 Аналитичен екстракция чувствителност том, л комплект за извличане на РНК / ДНК 100 "рибо-Sorb" 100 "рибо-препаративна" кит за амплификация и откриване на "PCR комплект" вариант FRT-g1-4 «PCR комплект" изпълнение FRT- g1-6 «PCR комплект" вариант FRT-g1-4 «PCR комплект" вариант FRT-g1-6 аналитична чувствителност, IU / мл 5x10 3 2,5x10 3 аналитична специфичност оценка аналитичен реагент специфичност не показва кръстосана реакция между генотиповете 1а, 1Ь, 2, 3а, 4, 5а и 6 от хепатит с вирус чрез използване на високо рекомбинация covariant положителни контролните проби и кръвната плазма проби, съответстващи на HCV генотипове. УСЛОВИЯ работа трябва да се извършва в лаборатория извършване molekulyarnobiologicheskie (PCR) изучава клинични проби за наличие на инфекциозни агенти, в съответствие с санитарно-епидемиологични правила SP "работа сигурност с микроорганизми III IV патогенност групи (опасност) и активатори на паразитни болести", SanPin "Санитарен епидемиологични изисквания за управление на медицински отпадъци "и насоките на MU" Организация на лабораториите, използващи методи за усилване н kleinovyh киселини при работа с материали, съдържащи микроорганизми патогенност групи I IV ". По време на работа винаги отговарят на следните изисквания: - Трябва да се разглежда като проби за инфекциозни и опасна работа, за да организират и съхранение в съответствие с SP "работа за сигурност с микроорганизми III IV групи по патогенност (опасност) и паразитни болести агенти." - за почистване и дезинфекция бутилирани проби или реактиви, използвайки дезинфектанти в съответствие с SP "работа сигурност с микроорганизми III IV патогенност групи (опасност) и паразитни болести агенти." - Лабораторният процес трябва да бъде еднопосочен. Анализът се извършва в 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 6 от 32

7 отделни стаи (зони). Работата трябва да започне в зоната на разпределение, да продължи в зоната на усилване и откриване. Не връщайте проби, оборудване и материали в зоната, в която процесът се извършва предишната стъпка. - Премахване на неизползваните реактиви в съответствие с SanPiN "Санитарни изисквания към управлението на медицински отпадъци." ВНИМАНИЕ! При отстраняване на отпадъците след амплификация (епруветки, съдържащи PCR продукти) недопустима отваряне на тръбите и пръски съдържанието, тъй като това може да доведе до замърсяване на PCR продукти лаборатория площ, оборудване и реагенти. Използвайте комплекта стриктно според предназначението, съгласно това ръководство. Позволете на оторизиран персонал да работи с комплекта. Не използвайте комплекта след изтичане на срока на годност. Използвайте ръкавици за еднократна употреба, престилки, предпазни очила по време на работа с пробите и реагентите. Измийте добре ръцете, след като приключите работата. Избягвайте контакт с кожата, очите и лигавиците. В случай на контакт, незабавно да се измие с вода и да се потърси медицинска помощ. Информационните листове за безопасност на материалите (MSDS) са достъпни при поискване. Допълнителни материали и оборудване ОБЛАСТ 1. Екстракция на РНК от клиничен материал 1. набор от реагенти за РНК / ДНК "рибо-Sorb" (N) "рибо препаративна" (TU) или друга препоръчителна FBUN CRI епидемиология при работа с пълна форми 3, Ламинарен бокс. 3. Vortex. 4. Микроцентрофуга за епруветки "Eppendorf" до 12 000 g. 5. термостат за тръби като "Епендорф" от 25 до 100 С. 6. Автомати на променлив обем (от 5 до 50 мкл, 20 мкл до 200 и от 100 до 1000 литра). 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 7, 32

7. Еднократни полипропиленови винтоустойчиви или плътно затворени епруветки от 1.5 ml. 8. Еднократни върхове с филтър до 100 μl, до 200 μl и до 1000 μl в стативи. 9. Вакуумно медицинско смукателно устройство с уловител на капан за отстраняване на супернатанта. 10. Еднократна употреба до 200 μl в статив. 11. Стативи за тръби с обем от 1,5 ml. 12. Хладилник от 2 до 8 ° С 13. самостоятелните дреха, шапки, обувки, ръкавици за еднократна употреба MU капацитет с дезинфекционен разтвор. ОБЛАСТ 2. Провеждане обратна транскрипторна реакция и амплификация в "реално време" 1 Комплект от реагенти за извършване на обратна транскрипция реакция "Реверте-L» (W) по време на работа образува пълен 3, Бокс абактериален въздух среда (PCR кутия). 3. Центрофугирайте / вихри. 4. Автоматични дозатори с променлив обем (от 5 до 50 μl и от 20 до 200 μl). 5. Еднократни върхове с филтър до 100 μl и до 200 μl в стативи. 6. Стативи за 0.5 ml или 0.2 ml или 0.1 ml епруветки (в зависимост от вида на използваната тръба). 7. Хладилник от 2 до 8 ° С фризер не по-висока от минус 16 ° С 8. Отделни роба, шапки, обувки, ръкавици за еднократна употреба MU капацитет за нулиране терминали. При извършване на обратно транскрипторна реакция, като се използва "Реверте-L»: 10. Еднократна полипропиленови епруветки 0.2 мл или 0,5 мл (в зависимост от модела, използван термоциклер или термостата, където реакцията на обратна транскрипция се провежда). 11. термостат за тръби като "Епендорф" от 25 до 100 ° С или програмируем термичен циклер (например, "Tertsik" ( "ДНК технология", Русия), Градиент Palm Cycler (Corbett изследвания, Австралия), GeneAmp PCR System 2700 (Applied Biosystems, САЩ)). 12. При определяне обратна транскрипторна реакция до по-малко от 10 2 проучване (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 8 от 32

9 проби автоматичен променлив обем (от 0,5 до 10 μl). 13. При определяне обратна транскрипторна реакция до по-малко от 10 тестови проби за еднократна употреба с филтър 10 мкл статив. Когато се работи с "PCR комплект": 14. програмируем термоциклер ротационен тип (например, ротор-Gene 3000 или 6000 (Corbett изследвания, Австралия), ротор-Gene Q (Qiagen, Германия)), или термоцикльор таблетка тип (например, icycler iq5 (Bio-Rad, USA)), или амплифициран SmartCycler II (Cepheid, USA), или Mx3000P, Mx3005P (Stratagene, USA) и препоръчваната FBUN изследователски институт по епидемиология в указания за използването на този реагент комплект). 15. Еднократна полипропиленови епруветки за PCR: а) тънкостенни PCR Епруветки 0.2 мл с изпъкнала капачка (nestripovannye или stripovannye), използвайки устройство за таблетка тип; б) тънкостенни тръби PCR 0.2 мл с плосък капак (nestripovannye) или stripovannye обем тръби от 0,1 мл при използване на ротационен тип устройство. в) Обем на PCR тръби 0.025 мл (Цефеиди, USA), като се използва устройство SmartCycler II (Cepheid, USA). 16. Маркиран статив (при използване на инструменти от типа "плосък"). 17. Еднократна полипропиленови епруветки за PCR (плосък капачка, nestripovannye) 0.5 мл 18. центрофуга и се означават тръби (Цефеиди, USA) като се използва SmartCycler II (Cepheid, USA). Примерен събиране, транспортиране и съхранение на изпитвания материал преди началото на работата трябва да бъдат запознати с указанията на "вземе, транспортиране, съхранение на клиничен материал за PTsRdiagnostiki", разработен от FSIS CRIE Rospotrebnadzor, Москва, 2008 За проучванията PCR с използване на периферна кръвна плазма. За кръвната плазма се събира в епруветка с 3% разтвор на EDTA скорост от 20: 1 (20 части кръв към 1 част EDTA). Затворена епруветка с кръв се обръща няколко пъти. В рамките на 6 часа след вземането на кръвта трябва да се вземе плазма и да се прехвърли в нова епруветка. За тази цел епруветка с кръв се центрофугира 20 минути при д, след което плазмата се събира и се прехвърля за разделяне еднократна 2x (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 9 от 32

10 епруветка. Плазмата може да се съхранява за не повече от 3 дни при температура от 2 до 8 ° C и дълго време при температура, не по-висока от минус 68 ° С. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 10 от 32

11 ФОРМАТА FRT ФОРМАТА FRT СЪСТАВ реагент "рибо-Sorb" вариант 50 реагент за РНК / ДНК екстракция от клиничен материал включва: Реагент Описание Обем мл разтвор Макс лизиращ разтвор за измиване един разтвор за измиване 3 Разтвор за измиване 5 1 флакон бутилка 50 1 флакон 20 януари флакон сорбент суспензия бял тампон 1,25 1 РНК 0,5 буферни тръби 5 реагент, предназначени за изолиране на РНК / ДНК от 50 проби, включително контрол. Включено в плесен сглобка 1 и 4. реагент "рибо-Prep" вариант 50 реагент за РНК / ДНК екстракция от клиничен материал включва: Реагент Описание Обем, Max мл лизисен разтвор до утаяване на разтвора за промиване на разтвора в продължение на 3 РНК-буфер за промиване 4 бутилка Прозрачно синьо флакон януари 20 януари 25 1 бутилка флакон 10 1.2 4 флакона реагент, предназначени за изолиране на РНК / ДНК от 50 проби, включително контрол. Включено в плесен възел 2 и 5. реагент "Реверте-L» 50 изпълнение комплект реагент, когато се съхранява в продължение на разтвор 3 лизис, лизис разтвор и за почистване 1 при температура от 2 до 8 ° С може да се утаи под формата на кристали. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 11 от 32

12 ФОРМАТА FRT сДНК шаблон на РНК включва: RT-G-микс-1 обратна транскриптаза RT-смес (MMLV) ДНК буфер реагент Описание Обем мл Max 0.01 0.125 5 тръби 5 0.03 тръби една епруветка 1, 2 1 епруветка Реактивният комплект 50 е предназначен за 60 реакции на обратната транскрипция, включително контроли. Реагент комплект "PCR комплект" вариант FRT-g1-4 реагент комплект за PCR амплификация на кДНК генотипове (1а, 1Ь, 2, 3а, 4) с HCV откриване gibridizatsionnofluorestsentnoy в "реално време" включва: PCR-смес-1- FRT HCV генотип 1b / 3a PCR микс-1-FRT HCV генотип 1а / 2 PCR микс-1-FRT HCV EKR / генотип 4 реагент Описание обем мл Брой на RT-PCR-смес-2-FEP / FRT полимераза (TaqF) FFP сДНК HCV генотип 1Ь / 3a FFP сДНК HCV генотип 1а / 2 FFP HCV сДНК EKR / 4 генотип ТЕ буфер тръба 0,6 1 0,6 0,6 1 1 тръба тръба тръба 3 0,3 0.03 3 тръби 0.2 1 тръба 0.2 1 тръба 0.2 1 тръба 0.5 1 тръба K Комплектът от реагенти е предназначен за 55 теста (165 реакции на амплификация), включително контролите. Включени в групата представлява 1, 2 и 3. набор от реагенти, свързани проби за контрол на екстракция етап :. 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / страница 12 от 32

13 ФОРМАТА FRT Описание Reagent том, мл Макс ОКО EKR STI-248-REC 0,5 0,5 1 тръба 1 тръба реагент "PCR комплект" вариант FRT-g1-6 комплект реагент за PCR амплификация на кДНК генотипове ( 1а, 1б, 2, 3а, 4, 5а, 6) HCV с откриване gibridizatsionnofluorestsentnoy в "реално време" включва: реагент Описание обем мл Макс PCR микс-1-FRT HCV генотип 1Ь / 3a PCR smes- 1-FRT HCV генотипове 1а / 2 PCR микс-1-FRT HCV генотипове 4 EKR / PCR микс-1-FRT HCV генотипове 5а / 6 RT-PCR-смес-2-FEP / FRT полимераза (TaqF) FFP сДНК HCV генотип 1Ь / 3a FFP сДНК HCV генотип 1а / 2 FFP HCV сДНК EKR / 4 генотип FFP KDN HCV генотипове 5а / 6 ТЕ буфер тръба 0,6 0,6 1 0,6 1 епруветка една тръба 1 тръба 0,6 0,3 0,03 4 4 тръби епруветки една епруветка 0,2 0,2 ​​0 1 тръба, 1 февруари флакон 0,2 0,5 1 тръба 1 туба кит реагент е предназначена за провеждане на тест 55 (220 амплификационни реакции), включително контрол. Включени в групата образува 4, 5 и 6. набор от реагенти, свързани екстракция контролни проби етап: 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / страница 13 от 32.

14 ФОРМАТА FRT Описание Reagent том, мл Макс ОКО EKR STI-248-REC 0,5 0,5 1 тръба 1 тръба PCR ИЗСЛЕДВАНИЯ СХЕМА PCR изследване се състои от следните етапи: Екстракция на РНК от клинични проби. Извършване на обратната транскрипционна реакция. Провеждане на усилване с детекция на хибридизация-флуоресценция в режим "в реално време". Анализ и тълкуване на резултатите. Подробности за метода на анализа се основава на вида на оборудването, използвано е представена в "Насоки за използване на комплект реагент за определяне и разграничаване на вирусни генотипове на хепатит С (HCV) в клинични проби чрез полимеразна верижна реакция (PCR) с откриване хибридизация-флуоресценция" AmpliSens HCV-генотип-FL »», разработен от Централния научно-изследователски институт по епидемиология FBUN. ИЗВЪРШВАНЕ НА РНК ОТ ИЗИСКВАНИТЕ ВЗЕМАНИЯ! Когато се работи с РНК трябва да ползвате само за еднократна употреба пластмасови консумативи със специален маркировка «RNasefree», «ДНКаза». РНК екстракция реагент комплекти използва препоръчани FBUN CRI Epidemiology: използване операционна процедура комплект "рибо-Sorb" реагенти, виж приложение 1 "Екстракция на РНК, като се използва реагент" рибо-Sorb ".. използване комплект реагенти "рибо-препаративна" процедура работи см. в допълнение 2 "Екстракция на РНК, като се използва реагент" рибо-препаративна ". ВНИМАНИЕ! Полученият препарат РНК не трябва да се съхранява, обратната реакцията 2x (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 14 от 32

Формулирането на FORMAT FRT трябва да се извърши незабавно след получаване на РНК проба. ИЗПЪЛНЕНИЕ НА РЕАКЦИОННАТА РЕАКЦИЯ Общият обем на реакционната смес е 20 ц1, включително обем на пробата РНК от 10 ц1. ВНИМАНИЕ! При работа с РНК е необходимо да се използват само пластмасови консумативи за еднократна употреба, със специално обозначение "RNasefree", "DNase-free". А. Приготвяне на епруветки за обратна транскрипция За да се вмъкнат реагенти и РНК проби в епруветки, се използват съдове за еднократна употреба с филтри. ВНИМАНИЕ! Компонентите на реакционната смес трябва да бъдат смесени непосредствено преди реакцията на обратна транскрипция. 1. Преди работата да започне да се размразява, разбъркайте добре въртящия се RT-mix и RT-G-mix-1. Изпускайте капките от капачките на епруветката. 2. Обърнете необходимия брой обем тръби на 0,2 мл или 0,5 (в зависимост от използвания модел термоциклер или термостат) за извършване на обратно транскрипторна реакция, в зависимост от броя на тестовите и контролни проби (една екстракция контрол (OK)). Обозначете епруветките. 3. Когато провеждате обратна транскрипция на пробите: а) Пригответе реакционната смес за 12 реакции. За тази цел добавете 5 μl от RT-G-mix-1 към епруветката с RT-mix, разбъркайте добре на вихъра и утайте капките от капачката на тръбата. б) Добавете 6 μl ревертаза (MMlv) към получения разтвор, пипете 5 пъти, разбъркайте с вихър. Сложете капките от капачката на епруветката чрез кратко центрофугиране. 4. При провеждане на обратна транскрипция на по-малко от 10 проби: За получаването на реакционната смес трябва да се смесва в отделни реагенти тръба на базата на 1 реакция е както следва: 10 л от RT-микс, 0,4 л RT-G-микс-1 и 0, 5 ц1 ревертаза (MMlv) (виж също Таблица 1). Когато в сместа се вкарват RT-G-mix-1 и ревертаза (MMlv), всеки реагент трябва да бъде с пипета поне 5 пъти. Разбъркайте внимателно сместа на вихъра и утайте капките от капачката на тръбата. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 15 от 32

16 FRT FORMAT ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Revertase (MMlv) е чувствителен към топлина! Не го оставете на стайна температура дълго време! Веднага след употреба почиствайте хладилника във фризера! Обемът на реагент за един реакция (L) Брой на клинични проби Схема подготви реакционната смес 10,00 0,4 0,5 RT-смесват RT-G-микс-1 обратна транскриптаза (MMLV), 3 април 8 3 2 4, 6,4 ± 0,05 5. Добавете 10 μl от приготвената реакционна смес към предварително приготвените епруветки. Таблица 1 6. Добавете 10 μl РНК проби, изолирани от клинични и контролни проби, в готови епруветки съгласно етикета. Разбъркайте внимателно вихъра и утаявайте капките от капачката на тръбата. ВНИМАНИЕ! Когато се прибавят РНК проби, изолирани с реактивния комплект RIBO-Sorb, е необходимо да се избегне поглъщането на сорбента в реакционната смес. Б. Извършване на обратната транскрипционна реакция 1. Поставете епруветките в термореактора (термостата) при 37 ° С в продължение на 30 минути. ВНИМАНИЕ! Когато се използва за определяне на обратно транскрипторна реакция cyclers със система за откриване на "реално време" трябва да се програмира устройство за изпълнение на програмата (вж. Таблица. 2 и "Насоки за използване на реагенти комплект за откриване и диференциация на вирусни генотипове на хепатит С (HCV) в клинични проби чрез полимеразна верижна реакция (PCR) с откриване хибридизация-флуоресценция "AmpliSens HCV-генотип-FL» », предназначена FBUN епидемиология CRI). Таблица 2 4 обеми от реагенти въведени са показани въз основа на броя на пробите (1 клинични проби и изолиране на РНК контрол етап) и запаса на 1 проба. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 16 от 32

17 ФОРМАТА FRT програма за обратна транскрипция на Амплификатори със система за откриване на "реално време" реакция 5 Етап температура, С времето флуоресценция Измерване Брой на циклите 1 мин 2. След завършване на реакционната тръба се добавят 20 микролитра от ДНК буфер, като се използва нова Върхът с филтър за всяка проба. Разбъркайте внимателно вихъра и утаявайте капките от капачката на тръбата. Получената в обратната транскрипционна реакция kdnk се използва за PCR амплификация. получаване на готов сДНК може да се съхранява при температура не по-висока от минус 16 ° С в продължение на 1 седмица при температура не по-висока от минус 68 ° С през цялата година. Амплификация с откриване в "реално време" А. Получаване на епруветки за усилване на избора на тръби за усилване зависи от термоциклер. За да се вмъкнат реагенти, проби kdnk и контролни проби в епруветки, се използват върхове за еднократна употреба с филтри. Общият обем на реакционната смес е 25 ц1, включително обема на пробата kdnk 10 ц1. ВНИМАНИЕ! Компонентите на реакционната смес трябва да бъдат смесени непосредствено преди извършването на PCR теста. Смесването на реагентите от изчисляването на необходимия брой реакции, включително тестването на тестовите и контролните проби, е необходимо съгласно таблицата за изчисления (вж. Таблици 3, 4). А1. Получаване на тръби за амплификация, използвайки комплекта "PCR комплект" реагенти вариант FRT-g1-4 пример 5, ротор-Gene 3000 или 6000 (Corbett изследвания, Австралия); Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия); iq5 (Bio-Rad, САЩ); Mx3000P (Stratagene, САЩ); "DT-96" ( "ДНК технология", Русия) и препоръчва FBUN CRI епидемиология в указания за използването на този реагент. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 17 от 32

18 ФОРМАТА FRT 1. Преди размразяване, разбърква се добре Vortex всички комплект реагенти и утайка капки към капачките на тръбата. 2. Обърнете необходимия брой тръби за амплифициране на определен брой тестови и контролни проби (екстракция една контролна РНК, два контрол усилване). Видът тръби трябва да се избира в зависимост от използвания инструмент. ВНИМАНИЕ! Всяка проба се анализира, като се използват три реакционни смеси, така че за всяка проба трябва да се приготвят 3 епруветки. При използване на устройства с ротационни тръби марка "obraztsa_1b / 3а», «obraztsa_1a / 2" и "obraztsa_vko / 4", съответно. Когато използвате плоски устройства, използвайте маркиран статив за тези цели. 3. Изберете три епруветки от 0,5 ml за приготвяне на реакционни смеси. Обозначете епруветките "1b / 3a", "1a / 2" и "VKO / 4". 4. Във всяка от трите епруветки, предназначени за получаване на реакционните смеси да се направи скоростта на реакцията е от 1: 5 л на RT-PCR микс-2-FEP / FRT, 0,5 л полимераза (TaqF) и 10 мкл от съответната PCR-микс -1-FRT HCV генотип (вж. също таблица. 3) PCR-Mix-1-FRT HCV генотипове 1б / 3a се въвежда в тръба «1б / 3a» т.н. Получената реакционна смес се завихря и се утаи от капачката на тръбата. ВНИМАНИЕ! Реакционните смеси трябва да се приготвят с резерв от 1 проба (виж таблица 3). 5. Добавете 15 μl от приготвената реакционна смес към епруветките, предназначени за амплификация, в съответствие с маркировката, т.е. реакционната смес "1b / 3a" се вкарва в тръбите, обозначени като "проба-1b / 3a" и т.н. 6. Получените тръби с нанасяне на реакционната смес в съответствие с маркировката Добавят се 10 ул сДНК проби, получени в обратна транскрипторна реакция, всяка проба, включително екстракция отрицателна контрола (С), изисква в 3 флакона, съдържащ реакция освободи смеси "1b / 3a", "1a / 2" и "VKO / 4". 7. Поставете контролни реакции: а) PCR отрицателна контрола (К) се добавя към епруветки, съдържащи реакционни смеси освободи «1б / 3a», «1а / 2" и "SAI / 4" в 10 мкл ТЕ буфер. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 18 от 32

19 ФОРМАТА FRT б) положителен контрол на PCR (К + 1б / 3a) към епруветката, съдържаща реакционната смес «1б / 3a" добавят 10 ул сДНК FFP HCV генотип 1Ь / 3a; в) PCR положителна контрола (С + 1а / 2) на епруветката, съдържаща реакционната смес «1а / 2" се добавят 10 ул сДНК FFP HCV генотип 1а / 2; г) PCR положителна контрола (С + EKR / 4) на епруветката, съдържаща реакционната смес "SAI / 4" добавят 10 ул FFP HCV сДНК EKR / генотип 4. Схема получаване реакционните смеси за обема на вариант FRT реагент на реакция (L) No. No. тестови проби клинични точки 6 10.00 5.00 6 0.50 брой клинични проби + 1 контрол етап на екстракция на РНК PCR 2 + контрол (N + 3, N брой клинични проби). PCR-смес-1- FRT HCV генотип * RT-PCR смес-2- FEP / FRT * Таблица 3 полимераза (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * обеми от реагенти, въведени с разлика, даден от 1 проба. А2. Получаване на епруветки за амплификация с използване на набор от "PCR комплект" реактиви вариант FRT-г Преди започване на размразяване, разбърква се добре Vortex всички комплект реагенти и утайка капки към капачките на тръбата. 2. Обърнете необходимия брой тръби за амплифициране на определен брой тестови и контролни проби (екстракция една контролна РНК, два контрол усилване). Видът тръби трябва да се избира в зависимост от използвания инструмент. ВНИМАНИЕ! Всяка проба се анализира, като се използват четири реакционни смеси, така че за всяка проба трябва да се приготвят 4 епруветки. При използване на 0.2 мл епруветки за въртяща се тръбна марка "obraztsa_1b / 3a» устройства "obraztsa_1a / 2", "obraztsa_vko / 4" и "obraztsa_5a / 6", съответно. При използване на устройства с плосък тип или при използване на 2х (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 19 от 32

20 FORMAT FRT епруветки за инструменти за ротор тип използват маркиран статив за тези цели. 3. Изберете четири епруветки от 0,5 ml за приготвяне на реакционни смеси. Маркирайте тръбите "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" и "5a / 6". 4. Във всяка от четири тръби, предназначени за получаване на реакционните смеси да се направи скоростта на реакцията е от 1: 5 л на RT-PCR микс-2- FRT HCV генотип (виж също Таблица 4..) с PCR-смес на 1- FRT HCV генотипове 1b / 3a се вмъкват в епруветката "1b / 3a" и т.н. Получената реакционна смес се завихря и се утаи от капачката на тръбата. Схемата за получаване реакционните смеси вариант FRT на един реакционен обем на реагент (L) No. No. клинично тестови проби точки 7 10,00 5,00 0,50 FEP / FRT, 0,5 л полимераза (TaqF) и 10 мкл от съответната PCR-микс -1-PCR смес-1- FRT HCV генотип * RT-PCR смес-2- FEP / FRT * Таблица 4 полимераза (TaqF) * 0 *,,,,,,,,, количества реагенти, изброени въведени с разлика за 1 проба. 5. Добавете 15 μl от приготвената реакционна смес към епруветките, предназначени за амплификация, в съответствие с маркировката, т.е. реакционната смес "1b / 3a" се вкарва в тръбите, обозначени като "проба-1b / 3a" и т.н. Ако за реакцията се използва амплифициране на отстранените епруветки, реакционните смеси трябва да бъдат въведени в съответствие със схемата, показана на Фиг. 7 Брой на клиничните проби + 1 контрола на етапа на екстракция на РНК + 2 PCR контрола (N + 3, N брой клинични проби). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 20 от 32

21 ФОРМАТ FRT 4 тръби, използвани за определяне на клинична проба смес «1б / 3a» Смес от «1а / 2" смес "SAI / 4" смес "5а / 6" Смес от «1б / 3a» Смес от «1а / 2" смес " VKO / 4 »Смес« 5а / 6 »Фигура 1. Схема за въвеждане на реакционни смеси и проби, когато се използват стрипирани тръби за производство на PCR. 6. Получените тръби с нанасяне на реакционната смес в съответствие с маркировката Добавят се 10 ул сДНК проби, получени в обратна транскрипторна реакция, всяка проба, включително екстракция отрицателна контрола (С), трябва да бъдат направени в 4 епруветки, съдържащи реакция нанасяне смеси "1b / 3a", "1a / 2", "EKO / 4" и "5а / 6". 7. Поставете контролни реакции: а) PCR отрицателна контрола (К) се добавят към епруветки, съдържащи реакционни смеси Поставят «1б / 3a», «1а / 2", "SAI / 4" и "5а / 6" в 10 мкл ТЕ буфер, б) положителен контрол на PCR (К + 1б / 3a) към епруветката, съдържаща реакционната смес «1б / 3a" добавят 10 ул сДНК FFP HCV генотип 1Ь / 3a; в) PCR положителна контрола (С + 1а / 2) на епруветката, съдържаща реакционната смес «1а / 2" се добавят 10 ул сДНК FFP HCV генотип 1а / 2; г) PCR положителна контрола (С + EKR / 4) на епруветката, съдържаща реакционната смес "SAI / 4" добавят 10 ул FFP HCV сДНК EKR / 4 генотип; г) PCR положителна контрола (С + 5а / 6) в тръбата с реакционната смес «5а / 6" добавят 10 ул сДНК FFP HCV генотипове 5а / 6. Б. Провеждане откриване амплификация в "реално време" устройство 1. програма (колоездач със система за откриване на "реално време"), за да се извърши подходящо амплификация и откриване на флуоресцентния сигнал на програмата "AmpliSens-1" (вж. Таблица. 5, 6 ). Таблица 5 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 21 от 32

22 ФОРМАТ FRT «AmpliSens-1" Програма за ротационни устройства 8 Температура Продължителност Измерване Брой Стъпка С фаза цикли флуоресценция Hold / Задръж мин 1 Temp-Ри 95 5 Колоездене / 5 колоездене от 95 5 Колоездене 2 / FAM / зелено с 40 колоездене на 2 JOE / жълто от Таблица 6 "AmpliSens-1" за таблетка тип устройства 9 и устройство идеално Cycler II (Cepheid, USA) температура Етап Продължителност измерване номер от стъпка цикли флуоресценция минути (900-10) с с 95 5 s с FAM, JOE / HEX / Cy с 2. Инсталирайте епруветките в клетките на реакционния модул на инструмента. 3. Започнете изпълнението на програмата за усилване с откриване на флуоресцентния сигнал. 4. След завършване на програмата започнете да анализирате и интерпретирате резултатите. АНАЛИЗ И ТЪЛКУВАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ Анализът на резултатите се извършва с помощта на софтуера на устройството, използвано за провеждане на PCR с откриване в реално време. Анализирайте кривите на натрупване на флуоресцентен сигнал над канала за флуорофора FAM (или подобно) и канала за JOE флуорофор (или подобен). Резултатите се интерпретират въз основа на наличието (или отсъствието) на пример 8, ротор-Gene 3000 или 6000 (Corbett изследвания, Австралия), ротор-Gene Q (Qiagen, Germany). 9 Например, Icycler iq5 (Bio-Rad, USA); Mx3000P, Mx3005 (Stratagene, USA); "DT-96" ( "ДНК технология", Русия) и препоръчва FBUN CRI епидемиология в указания за използването на този реагент. 10 За Smart Cycler II (Cepheid, САЩ). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 22 от 32

23 ФОРМАТА FRT пресичане крива флуоресценция монтирани на подходящо прагово ниво линия, която открива наличието (или отсъствието) на примерни стойности сДНК праговия цикъл на Ct в съответната колона в таблицата резултат. Резултатът от канала на амплификация се счита за положителна, ако кривата на флуоресценция е типично в реално време PCR S-образна форма, след като пресича праг линия в значително увеличение на флуоресценцията, отрицателна в отсъствието на крива на типична форма и пресечната точка с праговата линия (не стойност Ct или Cp) и съмнителни във всички останали случаи. Таблица 7 показва каналите, през които се откриват HCV генотипове за всяка реакционна смес. Таблица 7 реакция смес «1б / 3а» «1а / 2" "SAI / 4" "5а / юнското 11" Канал бъде открита генотипове HCV FAM / Green 1б 1а ASD 5а JOE / Hex / жълто / Cy3 3а счетоводни резултати в контролните проби Резултати Проучванията с PCR се считат за надеждни, ако се получат правилните резултати от преминаването на контролните проби в съответствие с таблицата за оценка на резултатите от контролните реакции (виж Таблица 8). 11 Включен във версията на комплекта за PCR на FRT-g1-6. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 23 от 32

24 ФОРМАТА FRT контрол реактивен Най смес OK К К + 1b / 3a Резултати за контрол на различни етапи от FAM на анализ / Green Не стойност Ct Не стойност Ct под пределната стойност ТАБЛИЦА 8 «1б / 3a» «1а / 2" "SAI / 4 »« 5а / 6 '12 резултатите от усилване на канала JOE / HEX / жълто / Cy3 FAM / Green JOE / HEX / жълто / Cy3 FAM / Green JOE / HEX / жълто / Cy3 FAM / Green JOE / HEX / Yellow / Cy3 Не значение Ct Не Ct стойност под граничната стойност к + 1а / 2 * Не Ct стойност не Ct стойност не Ct стойност никаква стойност Ct под граничната стойност Не otsuts Ct стойност tvuet стойност стойност Ct Не Ct Не стойност Ct Не стойност Ct Не стойност Ct Не стойност Ct * * * под граничната стойност под граничната стойност к + EKR / 4 * * * * * * * * под граничната стойност под граничната стойност к + 5а / 6 * * * * * * * Тази реакционна смес не се тества. * * Под граничната стойност ВНИМАНИЕ! Граничните стойности на Ct са показани в инсерта на PCR комплекта. Тълкуване на резултатите от изследването на клинични проби под пределната стойност 1. HCV генотип, присъстващи в пробата е установено чрез сравняване на амплификация в трите резултатите (за "PCR комплект" вариант FRT-g1-4) или четири тръби (за "PCR кит" вариант FRT-g1-6) в съответствие с таблица. 7, където а) Ако таблицата на резултатите за проба се определя стойност Ct, един съответния генотип на HCV РНК, след това се връща резултата "генотип"; б) Ако в таблицата с резултатите за пробата са определени две или повече Ct стойности, тогава се дава генотип за двойни, тройни и т.н. Изключение е следния случай: Ако пробата определена стойност Ct към реакционната смес "SAI / 4" канал JOE / Hex / жълто / Cy3 (4 HCV генотип) и «1б / 3a» Реакционната FAM смес канал / Green (1б генотип HCV), където стойността на Ct четвърти генотип голям Ct стойност за първи генотип при 10 или повече цикли, издаден на 12 е част от PCR комплект вариант FRT-g1-6. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 24 от 32

25 Формула ФРТ резултат "Генотип 4". В таблица 2. Ако резултатите за Ct стойността на пробата се определя само за SAI (реакционната смес "SAI / 4», FAM / Green канал) и е под граничната стойност, в облицовката, резултатът е даден «HCV генотип не е определено". По този начин, ако е известно, че концентрацията на HCV РНК в пробата е в аналитична чувствителност на реагенти, резултатът е даден «HCV генотип не е определено поради ниско вирусно натоварване". 3. Ако таблицата на резултатите за проби не Ct стойности за всички генотипове и Ct стойност за EKR (FAM канал в PCR-микс-1-FRT HCV EKR / генотип 4) не е определена или надвишава границата (посочено в вложката), след това е необходимо да се повтори изследването на PCR на тази проба, като се започне с етапа на екстракция на РНК. ВНИМАНИЕ! 1. Ако стойността Ct в поне една проба от PCR етапа на положителна контрола (К + 1б / 3a, К + 1а / 2, К + EKR / 4 или К + 5а / 6) надвишава граничната стойност, определена в обвивката или отсъства, е необходимо повторете теста за PCR за всички проби, като започнете с етапа на екстракция. 2. Ако отрицателната контрола за извличане на РНК (ОК) на поне един от реакционните смеси «1б / 3a», «1а 2 /» «5а / 6" и да е от използваните канали и / или "SAI / 4, реакционната смес "канал открит положителен JOE / Hex / жълто / Cy3 сигнал, повторете PCR за всички изследвани проби, за които се определя тази реакционна смес HCV генотип от екстракция стъпка РНК. 3. Ако отрицателен контрол PCR (К) за всяка реакционна смес, съгласно всяка една от каналите се открива чрез положителен сигнал, повторете PCR за всички изследвани проби, за които се определя тази реакционна смес HCV генотип от екстракция стъпка РНК. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 25 от 32

26 СРОК НА ЖИВОТ, УСЛОВИЯ НА ТРАНСПОРТИРАНЕ И СЪХРАНЕНИЕ Срок на годност. 12 месеца Набор от реагенти с изтекъл срок на годност не подлежи на прилагане. Срокът на годност на реагенти за съответства на датата, на която се отвори, отпечатана върху етикетите на неотворените реактиви, освен ако не е посочено друго в инструкцията. Транспорт. Комплектът от реагенти трябва да се транспортира при температура от 2 до 8 ° C не повече от 5 дни. При получаване, разглобявайте се в съответствие с посочените температури на съхранение. Съхранение. Комплекти реагенти "рибо-Sorb" и "рибо-Prep" се съхранява при 2 до 8 ° С комплекти реагенти "Реверте-L» и «PCR комплект" освен ОКО, ТЕ буфер и EKR STI-248-REC съхранение при температура не по-висока от минус 16 ° с ОКО, ТЕ буфер и EKR STI-248-REC от "PCR комплект" се съхранява при 2 до 8 ° с PCR смес беше-1-FRT HCV генотип 1Ь / 3a PCR микс-1-FRT HCV генотип 1а / 2, на PCR-микс-1-FRT HCV EKR / 4 генотип и PCR-смес-1-FRT HCV генотипове 5а / 6 съхранява на тъмно място. Условия за отпуск. За лечебни и превантивни и санитарни помещения. Жалби за качеството на набор от "AmpliSens на HCV-генотип-FL» реагенти насочени към производителя FBUN Централен научно-изследователски институт по епидемиология (Ул. Novogireevskaya, г. 3а) на работата на отдела с претенции и обучаващи организации (тел. (495) факс (495), отзиви и предложения за "AmpliSens" за продукта, които могат да оставят, попълване на формуляр на интернет страницата на потребителя: 2 (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 26 от 32.

27 Приложение 1. Екстракция на РНК Екстракция на РНК, използвайки "рибо-Sorb" реагент Процедура 1. разтвор лизиращ разтвор и промиване 1 (ако те се съхраняват при 2 до 8 ° С), затопля при 60 ° С до пълното разтваряне на кристалите. 2. Изберете необходимия брой епруветки за еднократна употреба с 1,5 ml (включително отрицателен контрол на екстракцията). Обозначете епруветките. 3. В долната част на всяка епруветка добавете 10 μl от EKO STI-248-rec. 4. Добавете 450 μL лизисен разтвор към епруветките. Обозначете епруветките. Забележка С голям обем проба, за да се улесни изолиране се смесват в отделна колба лизисен разтвор и EKR STI-248-REC (въз основа на една проба 450 мкл лизисен разтвор и 10 л EKR STI-248-REC), последвано разстояние от 450 мкл в предварително приготвени епруветки от 1.5 ml. 5. Добавете 100 μl от пробата към епруветките с разтвор за лизиране и VKO, като използвате върховете с филтъра. В отрицателна контролна (ОК) тръба за екстракция добавете 100 μl OKO. 6. плътно запечатана проба смесват добре чрез разбъркване и protsentrifugirovat за 5 секунди в 5 хиляди оборота / минута в микроцентрофуга за отстраняване на капки от вътрешната повърхност на капака на тръба. 7. Ресуспендирайте сорбента, енергично смесвайки се с вихъра. Добавете 25 μl ресуспендиран сорбент към всяка епруветка с отделен накрайник. 8. Разбъркайте съдържанието на вихровите епруветки и ги оставете 10 минути при стайна температура, като внимателно се смесват на всеки 2 минути. 9. Центрофугирайте епруветките в микроцентрофуга при 7,000 g (например 10,000 rpm за MiniSpin центрофуга, Eppendorf) в продължение на 1 минута. 10. Вземете супернатантата от всяка епруветка с отделен накрайник, като използвате вакуумно всмукателно устройство. 11. Добавете 400 μl промивен разтвор към епруветките. 1. Разбъркайте вихъра, докато сорбентът напълно се ресуспендира. Центрофугирайте епруветките в микроцентрофуга при 7,000 g в продължение на 1 минута. Изберете супернатантата 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 27 от 32

28 РНК ЕКСТРАКЦИЯ от всяка епруветка с отделен накрайник, използвайки вакуумна смукателна единица. 12. Добавете 500 μl промивен разтвор към епруветките 3. Смесете вихъра, докато завърши ресуспендирането на сорбента. Центрофугирайте епруветките в микроцентрофуга при 7,000 g в продължение на 1 минута. Изберете разтвор за измиване 3 от всяка епруветка с отделен накрайник, като използвате вакуумно всмукателно устройство. 13. Добавете 400 μl промивен разтвор към епруветките. 4. Разбъркайте вихъра, докато сорбентът напълно се ресуспендира. Центрофугирайте епруветките в микроцентрофуга при 7,000 g в продължение на 1 минута. Изцяло извадете измиващия разтвор 4 от всяка епруветка с отделен накрайник, като използвате вакуумно всмукателно устройство. 14. Изсушете сорбента, като поставите тръби с отворени капаци в термостат при температура 60 ° C в продължение на 15 минути. 15. Ресуспендирайте сорбента в 50 μl РНК буфер. Загрява се пещ при температура 60 ° С в продължение на 2 минути, смесва чрез разбъркване и се центрофугира за утаяване на сорбента в 12000 гр (например, об / мин за минивъртящи Центрофуга, Eppendorf) за 1 мин. ВНИМАНИЕ! Полученият РНК препарат не подлежи на съхранение, реакцията на обратната транскрипция трябва да се извърши непосредствено след получаване на РНК пробата. Вземете RNA разтвора за реакцията много внимателно, без да улавяте сорбента. Ако сорбентът е нарушен, е необходимо да се утаи в центрофуга. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / стр. 28 от 32

29 ПРИЛОЖЕНИЕ 2 Екстракция на РНК Екстракция на РНК с помощта на кит "рибо-Prep" реагенти Процедура 1. лизисен разтвор (ако се съхранява при 2 до 8 ° С), затопля при 65 ° С до пълното разтваряне на кристалите. 2. Изберете необходимия брой епруветки за еднократна употреба с 1,5 ml (включително отрицателни и положителни контроли за екстракция). 3. В долната част на всяка епруветка добавете 10 μl от EKO STI-248-rec. 4. Добавете 300 μl лизисен разтвор към епруветките. Обозначете епруветките. Забележка С голям обем проба, за да се улесни изолиране се смесва в отделен флакон и лизис EKR STI-248-REC (въз основа на една проба 300 ул лизис и 10 мкл EKR STI-248-REC), последвано от разстояние 300 ml от сместа в предварително приготвени епруветки от 1.5 ml. 5. В епруветки с разтвор за лизиране и VKO добавете 100 μl от пробата, като използвате върховете с филтър. В отрицателна контролна (ОК) тръба за екстракция добавете 100 μl OKO. 6. Тръбите се смесват добре чрез разбъркване, protsentrifugirovat за 5 секунди в микроцентрофуга за отстраняване на капки от вътрешната повърхност на капака и да се затопли в продължение на 5 минути при 65 ° С в инкубатор. 7. Добавете 400 μl утаен разтвор към епруветките, разбъркайте добре с вихър. 8. Центрофугирайте микроцентрофужни епруветки при 12000 грама (например, об / мин за минивъртящи Центрофуга, Eppendorf) в продължение на 5 минути. 9. Внимателно отстранете супернатанта, без да докосвате утайката, като използвате вакуум аспиратор и отделен накрайник за всяка проба. 10. Добавете 500 μl промивен разтвор към епруветките 3, затваряйте плътно капаците, внимателно измийте утайката, завъртете епруветките 3-5 пъти. Възможно е да се проведе процедурата, по едно и също време за всички тръбите, е необходимо за покриване на епруветката в багажник на върха на капака или друга позиция, като ги натиснете и завъртете статива. 11. Центрофугирайте при 12,000 g за 1 до 2 минути в микроцентрофуга. 12. Внимателно, без улавяне на утайка, супернатантата далеч, 2x (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / стр. 29 от 32

30 РНК ЕКСТРАКЦИЯ, като се използва блок за вакуум засмукване и отделен връх за всяка проба. 13. Добавете 200 μl промивен разтвор 4 към епруветките, затворете плътно капака и внимателно измийте пелетата, като обърнете тръбите 3-5 пъти. Можете да извършите процедурата едновременно за всички тръби, за това е необходимо да покриете тръбите в триножник отгоре с капак или друг статив, да ги натиснете и да завъртите статива. 14. Центрофугирайте при 12,000 g в продължение на 2 минути в микроцентрофуга. 15. Внимателно, без да се улавя утайката, внимателно изберете супернатантата, като използвате вакуумно всмукателно устройство и отделен накрайник за всяка проба. 16. Поставете епруветките в термостат при температура 65 ° C в продължение на 5 минути, за да изсушите утайката (с капачките на тръбите отворени). 17. Добавете 50 μl РНК буфер към епруветките. Разбърква се във вихъра. Поставете в термостат при 65 ° С в продължение на 5 минути, като периодично го разклащате на вихъра. 18. Центрофугирайте епруветките при 12,000 g в продължение на 1 минута в микроцентрофуга. Супернатантата съдържа пречистена РНК. Пробите са готови за реакция на обратна транскрипция и PCR. ВНИМАНИЕ! Полученият РНК препарат не подлежи на съхранение, реакцията на обратната транскрипция трябва да се извърши непосредствено след получаване на РНК пробата. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 30 от 32

31 СИМВОЛИ, ИЗПОЛЗВАНИ В ПЕЧАТНИТЕ ПРОДУКТИ Код Номер Код на партидата Внимание! Вижте придружаващия максимална документация броя на тест продукт е за ин витро диагностика на дата промени в горна граница температура температурна граница, се отнасят до упътване за употреба избягва слънчева светлина датата на производство на производителя 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) / VER / р 31 от 32

32 Брой мястото на LA IVI променя долна долен лист същност на промените промените добавят каталожен номер R-V1-G (1-4) - 2 (RG, IQ, MX, Dt, SC) за образуване на комплект 3 Премахване на стоките номера за формулировки 1 и 4 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / страница 32 от 32

Amplisense hcv fl

Етапи на хепатит в
Цената на Mpiviropack

Всичко за хепатит С

Лечение, симптоми, наркотици

Хепатит с rcc ампликон hcv fl

Хепатит с rcc ампликон hcv fl

Хепатитът се нарича остри и хронични възпалителни заболявания на черния дроб, които не са фокални, но често срещани. При различни хепатити, методите на инфекция са различни, те също се различават в степента на прогресиране на заболяването, клиничните прояви, методите и прогнозата на терапията. Дори симптоматиката на различните видове хепатит е различна. И някои симптоми са по-тежки от други, което се определя от вида на хепатита.

Основните симптоми

  1. Пожълтяване. Симптомите често се срещат и се дължат на факта, че билирубинът влиза в кръвта на пациент с увреждане на черния дроб. Кръвта, която циркулира през тялото, я пренася на органи и тъкани, оцветява ги в жълто.
  2. Появата на болка в областта на десния хипохондриум. Тя възниква поради увеличаването на размера на черния дроб, което води до появата на болка, която е тъпа и продължителна или има пароксизмален характер.
  3. Влошаване на здравето, придружено от треска, главоболия, замайване, храносмилателни нарушения, сънливост и летаргия. Всичко това е следствие от действието на билирубина върху тялото.

Остър и хроничен хепатит

Хепатитът при пациенти има остри и хронични форми. В остра форма те се проявяват в случай на вирусно увреждане на черния дроб, както и при отравяне с различни видове отрови. При остри форми на заболяването състоянието на пациентите се влошава бързо, което допринася за ускореното развитие на симптомите.

С тази форма на заболяването са възможни благоприятни прогнози. С изключение на превръщането му в хронично. В остра форма болестта лесно се диагностицира и лесна за лечение. Нелекуваният остър хепатит лесно се развива в хронична форма. Понякога при тежко отравяне (напр. Алкохол) хроничната форма се получава сама. В хроничната форма на хепатит се извършва процесът на заместване на съединителната тъкан на чернодробните клетки. Той е слабо изразен, той е бавен и поради това понякога остава недиагностициран до появата на цироза на черния дроб. Хроничният хепатит се лекува по-зле и прогнозата за лечението му е по-неблагоприятна. При острото развитие на заболяването се влошава състоянието на здравето, се развива жълтеникавост, развива се интоксикация, функционалното функциониране на черния дроб намалява, съдържанието на билирубин се увеличава в кръвта. С навременното откриване и ефективно лечение на хепатита в остра форма, пациентът най-често се възстановява. С продължителността на заболяването за повече от шест месеца, хепатитът преминава в хронична форма. Хроничната форма на заболяването води до сериозни нарушения в организма - увеличават се слезката и черния дроб, метаболизмът се нарушава, възникват усложнения под формата на чернодробна цироза и онкологични образувания. Ако пациентът има нисък имунитет, терапевтичната схема е неправилна или има зависимост от алкохол, преходът на хепатит към хронична форма заплашва живота на пациента.

Видове хепатит

Хепатитът има няколко типа: A, B, C, D, E, F, G, те също се наричат ​​вирусен хепатит, защото причината за появата им е вирусът.

Този тип хепатит се нарича болка на Botkin. Има инкубационен период от 7 дни до 2 месеца. Нейният причинителен агент - вирус на РНК - може да бъде предаден от болен човек на здрав човек чрез продукти с лошо качество и вода, контакт с битови предмети, които пациентът използва. Хепатит А е възможен в три форми, те се подразделят според силата на проявата на болестта:

  • в остра форма с жълтеница, черният дроб е сериозно увреден,
  • когато подозрителен без жълтеница, можем да говорим за по-лека версия на болестта,
  • в субклинична форма, дори не можете да забележите симптомите, въпреки че заразеният е източникът на вируса и може да зарази други.

Това заболяване се нарича серумен хепатит. Съпровожда се от повишаване на черния дроб и далака, появата на болка в ставите, повръщане, температура, увреждане на черния дроб. То тече или в остри или хронични форми, което се определя от състоянието на имунитета на болното лице. Начини на инфекция: при инжекции с нарушение на санитарните правила, сексуален контакт, по време на кръвопреливане, използване на лошо дезинфекцирани медицински инструменти. Продължителността на инкубационния период е 50 ÷ 180 дни. Честотата на хепатит В намалява с ваксинацията.

Този вид заболяване е едно от най-сериозните заболявания, тъй като често е придружено от цироза или рак на черния дроб, което води до фатален изход. Болестта не се поддава на терапия и освен това, след като веднъж се е появил отново с хепатит С, човек може многократно да бъде заразен със същото заболяване. Излекувай решаване HCV: хепатит С, след като заболяването при острата форма, се възстановява 20% от пациентите, а 70% от пациентите сами тялото не е в състояние да се възстанови от вируса, и болестта става хронична. За да установите причината, поради която някои са излекувани, а други не са, все още не е възможно. Хроничната форма на самия хепатит С няма да изчезне, така че трябва да се лекува. Диагностика и лечение на остра HCV носи инфекциозни заболявания лекар, хронична форма на заболяването - хепатолог или гастроентеролог. Можете да се заразят по време на преливане на плазма или кръв от заразен донор, чрез използване на лошо третирани MEDINSTRUMENT, сексуално и болно майка преминава инфекцията на детето. Хепатит С вирусът (HCV) бързо се разпространява по света, броят на пациентите отдавна надхвърли сто и сто милиона души. Преди това HCV не се поддава на терапия, но сега болестта може да бъде излекувана, като се използват модерни директно действащи антивируси. Само тази терапия е доста скъпа, но не всеки може да си го позволи.

Този тип хепатит D е възможен само при коинфекция с вируса на хепатит В (коинфекция - случай на инфекция на една клетка от вируси от различен тип). Той е придружен от масивно увреждане на черния дроб и остро развитие на болестта. Начини на инфекция - получаване на вируса на болестта в кръвта на здрав човек от вирусен носител или болен човек. Инкубационният период трае 20 ÷ 50 дни. Външно, ходът на болестта прилича на хепатит В, но формата му е по-тежка. Може да стане хроничен след преминаване към цироза. Възможно е да се извърши ваксинация, подобна на тази, използвана при хепатит В.

Той леко прилича на хепатит А по курса и механизма на предаване, тъй като то също се предава точно през кръвта. Неговата особеност е появата на светкавични форми, водещи до фатален изход за период не по-дълъг от 10 дни. В други случаи тя може да бъде ефективно излекувана и прогнозата за възстановяване често е благоприятна. Изключение може да е бременността, тъй като рискът от загуба на дете е близо до 100%.

Този тип хепатит все още не е проучен. Известно е само, че заболяването е причинено от две различни вируси: един изолирани от кръв донора, втори намерено във фекалиите на пациенти, получаващи хепатит след преливане на кръв. Симптоми: жълтеница, треска, асцит (натрупване на течност в корема), увеличение на черния дроб и далака, увеличение в нивата на билирубин и чернодробните ензими, поява на промени в урината и изпражненията, както и обща интоксикация. Ефективните методи за лечение с хепатит F все още не са разработени.

Този тип хепатит е подобен на хепатит С, но не е толкова опасен, тъй като не допринася за появата на цироза и рак на черния дроб. Цирозата може да се появи само при коинфекция на хепатит G и С.

диагностика

Вирусният хепатит е подобен на симптомите един към друг, точно както някои други вирусни инфекции. Поради тази причина е трудно да се определи точно диагнозата на пациента. Следователно, за да се изяснят вида на хепатита и правилната цел на терапията, са необходими лабораторни кръвни тестове за идентифициране на маркери - индикатори, които са специфични за всеки тип вирус. След като идентифицираха наличието на такива маркери и съотношението им, е възможно да се определи степента на заболяването, неговата активност и възможният резултат. За да се проследи динамиката на процеса, след определен период от време изследването се повтаря.

Как се лекува хепатит С?

Текущи режими на лечение за хронична HCV намалени до комбинираната антивирусна терапия, включително antivirusniki директно действащи тип sofosbuvir, velpatasvira, daklatasvira, ledipasvira в различни комбинации. Понякога се добавят рибавирин и интерферони, за да се повиши тяхната ефективност. Тази комбинация от активни вещества спира възпроизвеждането на вируси, като спасява черния дроб от разрушителните им ефекти. Такава терапия има няколко недостатъка:

  1. Цената на лекарствата за борба с хепатитния вирус е висока, не всеки може да ги купи.
  2. Приемането на някои лекарства е придружено от неприятни нежелани реакции, включително треска, гадене, диария.

Продължителността на лечението на хронични форми на хепатит отнема от няколко месеца до една година в зависимост от генотипа на вируса, степента на увреждане на тялото и използваните лекарства. Тъй като хепатит С засяга предимно черния дроб, от пациентите се изисква да следват строга диета.

Характеристики на HCV генотипове

Хепатитът С е един от най-опасните вирусни хепатити. Болестта се причинява от вирус, съдържащ РНК, наречен Flaviviridae. Вирусът на хепатит С се нарича "лек убиец". Такъв неестествен епитет, който е получил поради факта, че в началния етап болестта изобщо не е придружена от някакви симптоми. Няма признаци на класическа жълтеница, няма болка в областта на десния хипохондриум. Установяването на наличието на вируса не може да стане по-рано от няколко месеца след инфекцията. И преди това няма реакция на имунната система напълно и е невъзможно да се открият маркери в кръвта и следователно няма възможност за генотипизиране. Особеността на HCV е също така, че след влизането в кръвния поток по време на процеса на възпроизвеждане, вирусът започва бързо да мутира. Такива мутации засягат имунната система на заразените, за да се адаптират и да се борят с болестта. В резултат на това заболяването може да продължи няколко години без симптоми, след което се появява почти цироза или злокачествен тумор. И в 85% от случаите болестта от острата форма става хронична. Вирусът на хепатит С има важна характеристика - разнообразието на генетичната структура. В действителност, хепатит С е съвкупност от вируси, класифицирани според техните структурни варианти и подразделени на генотипове и подтипове. Генотипът е сума от гени, кодиращи наследствени черти. Докато медицината познава 11 генотипа на вируса на хепатит С, които имат свои собствени подвидове. Генотипът се обозначава с номера от 1 до 11 (въпреки че в клиничните проучвания се използва предимно генотип 1 ÷ 6), а подтиповете, като се използват буквите от латинската азбука:

В различните страни генотипите на HCV се разпределят по различни начини, например в Русия най-често се срещат от първия до третия. Тежестта на хода на заболяването зависи от вида генотип, те определят схемата на терапията, продължителността й и резултата от лечението.

Тъй като в света се разпространяват HCV щамове

Генотипите на хепатит С се разпределят хетерогенно по целия свят, като най-често се срещат генотипове 1, 2 и 3, а в някои области изглежда така:

  • в Западна Европа и в неговите източни райони, генотипи 1 и 2 са най-чести,
  • в Съединените щати, подтипове 1а и 1б,
  • в Северна Африка най-често срещан е генотипът 4.

В рисковата зона на възможна HCV инфекция са хората с кръвни заболявания (тумори на хематопоетичната система, хемофилия и др.), Както и пациенти, лежащи на лечението в отделите за диализа. Най-често срещаният в света е генотипът 1 - той се отчита

50% от общия брой на случаите. На второ място в разпространението - генотип 3 с малко над 30%. Разпространението на HCV в Русия има значителни разлики от световните или европейските варианти:

  • генотип 1b

50% от случаите,

  • върху генотип 3а

    20%

  • хепатит 1а са заразени

    10% от пациентите,

  • хепатит с генотип 2 е намерен в

    Но не само генотипът зависи от трудността на HCV терапията. Ефективността на лечението се влияе и от следните фактори:

    • възраст на пациентите. Шансът за излекуване на младите хора е много по-висок,
    • жените могат да бъдат лекувани по-лесно от мъжете,
    • значителна степен на увреждане на черния дроб - предимството на резултата е по-високо с по-малко увреждане,
    • големината на вирусното натоварване - колкото по-малко вируси в тялото по време на лечението, толкова по-ефективна е терапията,
    • теглото на пациента: колкото по-високо е, толкова по-сложно става лечението.

    Следователно схемата на лечение се избира от лекуващия лекар, въз основа на горните фактори, генотипизиране и препоръки на EASL (Европейска асоциация за чернодробно заболяване). EASL препоръчва препоръките му да бъдат актуални и, тъй като се появяват нови ефективни лекарства, да се лекуват препоръчваните схеми на хепатит С.

    Кой е изложен на риск от HCV инфекция?

    Както е известно, вирусът на хепатит С се предава чрез кръвта и следователно най-вероятно се заразяват са:

    • пациентите, които получават кръвопреливания,
    • пациенти и клиенти в зъболекарски кабинети и лечебни заведения, където неправилно стерилизират медицински инструменти,
    • поради нестерилни инструменти, може да е опасно да посетите маникюр и козметични салони,
    • от лошо изработени инструменти също могат да страдат от любители на пиърсинг и татуировки,
    • рискът от инфекция е висок сред тези, които употребяват наркотици поради многократното използване на нестерилни игли,
    • плода може да се зарази от майка, заразена с хепатит С,
    • в сексуалното удостоверение или акт, инфекцията също може да стигне до организъм на здравия човек.

    За какво се лекува хепатит С?

    Вирусът на хепатит С не беше напразно смятан за "нежен" вирус-убиец. Тя може от години да не се прояви, след което внезапно се появява под формата на усложнения, придружени от цироза или рак на черния дроб. Но диагнозата на HCV е поставила над 177 милиона души в света. Лечението, което е било използвано до 2013 г., комбинирано инжектиране на интерферон и рибавирин, дава възможност на пациентите да излекуват, но не повече от 40-50%. Освен това, той е придружен от сериозни и болезнени странични ефекти. Ситуацията се е променила през лятото на 2013 г., след като е бил farmgigantom САЩ Gilead Sciences са патентовани sofosbuvir вещество се освобождава под формата на лекарството под марката Sovaldi, който се състои от 400 мг от лекарството. Той стана първият пряко действащ антивирусен наркотик (PDPD) за борба с HCV. Резултати от клинични проучвания sofosbuvir доволни медицински ефективност, което се постига съгласно стойността на генотип на 85 ÷ 95%, докато продължителността на курс на лечение в сравнение с лечението с интерферон и рибавирин, повече от два пъти. И въпреки че Sofosbuvir е патентовал фармацевтичната компания Gilead, той е синтезиран през 2007 г. от Michael Sophia, служител на Pharmasett, който впоследствие е придобил от Gilead Sciences. От името на Майкъл веществото, синтезирано от него, се наричаше софосбувир. Самият Майкъл София заедно с група от учени, които са направили поредица от открития, които разкриват същността на HCV, създавайки по този начин ефективно лекарство да се лекува, спечели Ласкер-DeBakey Клинична медицински изследвания за. Е, печалбата от прилагането на нов ефективен инструмент почти отиде в Галаад, който постави монополни цени на Sovvaldi. Освен това компанията защитава своето развитие със специални патенти, според които Gilead и някои от неговите партньорски компании стават собственици на изключителното право да произвеждат оригиналния PFDP. В резултат на това Gilead пристигна само за първите две години от прилагането на лекарството многократно блокира всички разходи, че компанията, направени за придобиването на Pharmasett, получаване на патент и последващите клинични проучвания.

    Какво представлява софосбувир?

    Ефективността на това лекарство в борбата срещу HCV е била толкова висока, че сега почти няма терапевтична схема, която да е пълна без приложението му. Sophosbuvir не се препоръчва за употреба като монотерапия, но при сложна употреба показва изключително високи резултати. Първоначално лекарството се използва в комбинация с рибавирин и интерферон, което позволява в некомплицирани случаи да се лекуват само за 29 седмици. И това въпреки факта, че само лечението с интерферон и рибавирин е било половината от ефективността и продължителността му понякога надвишава 40 седмици. След 2013 г. всяка следваща година донесе новина за появата на все повече и повече нови лекарства, които успешно се справят с вируса на хепатит С:

    • през 2014 г. се появи daklatasvir,
    • 2015 г. е годината на раждане на ladypasvira,
    • 2016 беше доволен от създаването на велипасвирата.

    Daklataswir се освобождава от Bristol-Myers Squibb като препарат на Daklinza, съдържащ 60 mg активна съставка. Следващите две вещества бяха създадени от силите на учените от Галаад и тъй като нито един от тях не беше подходящ за монотерапия, в комбинация със софосбувир бяха използвани само лекарства. За да се улесни прилагането на терапията с Gilead, новосъздаденото лекарство е незабавно освободено в комбинация със софосбувир. Така че имаше подготовка:

    • Harvoni, комбиниращ sophosbuvir 400 mg и ладипасвир 90 mg,
    • Epclusa, който включва 400 mg софосбувир и 100 mg вепатасвир.

    При терапията с daklatasvira трябваше да се вземат две различни препарати на Sowaldi и Daklinsu. Всяка от двойките комбинации от активни вещества се използва за лечение на определени генотипове на HCV според терапевтичните режими, препоръчани от EASL. И само комбинацията от софосбувира с велпатасвир се оказа пантенотично (универсално) средство. Еклесът заздравява всички генотипове на хепатит С с практически същата висока ефективност от приблизително 97 ÷ 100%.

    Появата на генерични лекарства

    Клиничните изпитвания потвърждават ефективността на лечението, но всички тези високо ефективни лекарства имат един съществен недостатък - твърде високи цени, които не им позволяват да купят по-голямата част от болните. Монополно високи цени за продуктите, установени от Gilead, причинени възмущение и скандал, които направиха собственици на патенти, за да направят някои отстъпки, оставяйки някои фирми от Индия, Пакистан, Египет и лицензи за производство на аналози (генерични продукти) е толкова ефективни и популярни наркотици. Освен това борбата с притежателите на патенти, предлагащи наркотици за лечение на предубедени цени, оглавяваше Индия като страна, в която живеят милиони пациенти с хроничен хепатит С. В резултат на тази борба - Галаад е издал 11 индийски компании лицензи и патентовани разработки за самостоятелно освобождаване първо на sophosbuvira, а след това и на други от новите си лекарства. След като получи лиценза, индийските производители бързо установиха производството на генерични лекарства, като присвоиха произведените продукти със собствени търговски наименования. За първи път се появиха Soveneri jenerkiki, след това Daklinza, Harvoni, Epclusa, а Индия стана световен лидер в производството им. Индийските производители по лицензното споразумение плащат 7% от спечелените средства в полза на притежателите на патенти. Но дори и при тези плащания разходите за генерични лекарства, произведени в Индия, са десетки пъти по-малки от тези на оригиналите.

    Механизми на действие

    Както вече беше посочено по-горе, нововъзникващите новости на HCV терапията са свързани с PFDD и пряко засягат вируса. Докато интерферонът с рибавирин, използван по-рано за лечение, засилва човешката имунна система, помагайки на тялото да устои на болестта. Всяко от веществата действа по вируса по свой начин:

    1. Софосбувир блокира РНК полимеразата, като по този начин инхибира репликацията на вируса.
    1. Дакаласвир, лепидавир и велпатасвир са инхибитори на NS5A, които предотвратяват разпространението на вируси и тяхното навлизане в здрави клетки.

    Подобен посочен ефект позволява успешно да се бори с HCV, като се прилага терапия sophosbuvir, свързан с дакаласвир, ledipasvir, велапасвир. Понякога, за да се подобри ефектът върху вируса, към двойката се добавя трети компонент, който най-често е рибавирин.

    Производители на генерични лекарства от Индия

    Компаниите в страната са използвали предоставените им лицензи и сега Индия произвежда следните генерични лекарства:

    • Hepcvir е производител на Cipla Ltd.,
    • Hepcinat - Natco Pharma Ltd.,
    • Cimivir - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • MyHep е производител на Mylan Pharmaceuticals Private Ltd.,
    • SoviHep - "Зидус Хептиза" ООД,
    • Sofovir е производител на Hetero Drugs Ltd.,
    • Resof - произвежда компанията Dr Reddy # 8217, s Laboratories,
    • Вирсо - освобождава Страда Арколаб.

    Daklinsa аналози също правят в Индия:

    • Natdac от Natco Pharma,
    • Дачихеп от Зидус Хептиза,
    • Daclahep от Hetero Drugs,
    • Dactovin от Strides Arcolab,
    • Daclawin от Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • Mydacla от Mylan Pharmaceuticals.

    Следвайки Галаад, индийските производители на лекарства също усвоиха производството на Харвуни, което доведе до такива генерични лекарства:

    • Ledifos - освобождава Hetero,
    • Hepcinat LP - Natco,
    • Myhep LVIR - Mylan,
    • Hepcvir L - Cipla Ltd.,
    • Cimivir L-Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • LediHep - Зидус.

    И още през 2017 г. започна производството на следните индийски генерични лекарства:

    • Velpanat пусна фармацевтичната компания Natco Pharma,
    • освобождаването Velasof е овладял Hetero Drugs,
    • SoviHep V е стартиран от Zydus Heptiza.

    Както можете да видите, индийските фармацевтични компании не са далеч зад себе си от американските производители, достатъчно бързо усвояване на новоразработени продукти, при спазване на всички качествените, количествените и терапевтични характеристики. В допълнение, включително фармакокинетична биоеквивалентност спрямо оригиналите.

    Изисквания за генерични лекарства

    Едно генерично лекарство, наречено лекарство, което може да замести основните лекарства с патент за основни фармакологични свойства. Те могат да бъдат освободени както в присъствието, така и при отсъствието на лиценз, само неговата наличност прави издаването на аналогова лицензия. В случай, че лиценз бе предоставен на индийски фармацевтични компании, Gilead им предостави технологията за производство, давайки на притежателите на лицензи правото на независима ценова политика. За да може даден аналог на лекарството да бъде считан за общ, той трябва да съответства на редица параметри:

    1. Необходимо е да се съблюдава съотношението на най-важните фармацевтични компоненти в препарата според качествени, както и количествени стандарти.
    1. Придържайте се към съответните международни стандарти.
    1. Необходимо е да се спазват задължителните условия за производство.
    1. В препаратите трябва да се поддържа еквивалентен еквивалент на параметрите на засмукване.

    Струва си да се отбележи, че СЗО се ангажира да защитава достъпа до лекарства, които с помощта на генерични средства от бюджета заменят с тях скъпи маркови лекарства.

    Египетска генерична софосбувира

    За разлика от Индия, египетските фармацевтични компании не излязоха на световните лидери в производството на генерични продукти от хепатит С, въпреки че усвоиха производството на аналози на софосбувир. Вярно е, че в по-голямата част от произведените от тях аналози не се разрешава:

    • MPI Viropack, произвежда лекарството Marcyrl Pharmaceutical Industries # 8229, една от най-ранните египетски генерични лекарства,
    • Хетерософир, издаден от Pharmed Healthcare. е единственото генерично лицензирано в Египет. На опаковката под холограмата е скрит код, който ви позволява да проверите оригиналността на уеб сайта на производителя на наркотици, като по този начин с изключение на неговия фалшив,
    • Grateziano, произведен от Pharco Pharmaceuticals,
    • Sofolanork, продуциран от Vimeo,
    • Sofocivir, произведено от ZetaPhar.

    Генерици за контрол на хепатита от Бангладеш

    Друга държава, която произвежда генерични лекарства в големи количества срещу HCV, е Бангладеш. Освен това, тази страна дори не се изисква лиценз за производство на аналози на маркови лекарства, тъй като до 2030 г. тя позволи на фармацевтичните компании да произвеждат такива медицински препарати без необходимите документи за лицензиране. Най-известният и оборудван с най-новите технологии е фармацевтичната компания Beacon Pharmaceuticals Ltd. Проектът за производствени мощности е създаден от европейски специалисти и отговаря на световните стандарти. Beacon произвежда следните генерични лекарства за лечение на вируса на хепатит С:

    • Софарал, генеричен продукт от софосбувира, съдържа активно вещество от 400 mg. За разлика от традиционните опаковки в бутилки с 28 броя, Sophoral произвежда под формата на блистери от 8 таблетки в една чиния,
    • Дакавир е дакаласвира, една таблетка от лекарството съдържа 60 mg от активната съставка. Те също го освобождават под формата на блистери, но всяка плака съдържа 10 таблетки,
    • Sofosvel е генеричен Epclusa, съдържа софасубувир 400 mg и вепатасвир 100 mg. Pangenotipny (мулти) лекарство, ефективно за лечение на HCV генотип 1 ÷ 6. В този случай, без обичайната опаковка във флакони, таблетки са опаковани в блистери 6 броя във всяка плака.
    • Darvoni е сложен препарат, комбиниращ 400 mg дози и 100 mg дакаласвир. Ако е необходимо, комбинирайте терапията със софосбувир с дакаласвир, като използвате препарати от други производители, е необходимо да вземете таблетка от всякакъв вид. И Бейкън ги обедини в едно хапче. Darvoni е опакован в блистери от 6 таблетки на една чиния, изпратени само за износ.

    Когато купувате лекарства от Beacon въз основа на курса на терапия, трябва да се вземе предвид оригиналността на опаковката им, за да се закупи количеството, необходимо за лечение. Най-известните индийски фармацевтични компании Както бе споменато по-горе, след като фармацевтичните компании в страната получиха лицензи за производство на генерични лекарства за HCV терапия, Индия се превърна в световен лидер в производството им. Но сред многото компании, заслужава да се отбележат няколко, чиито продукти в Русия са най-известни.

    Natco Pharma Ltd.

    Най-популярната фармацевтичната компания Natco Pharma Ltd., лекарства, които са спасили живота на няколко десетки хиляди случаи на хронична форма на хепатит С. Той е усвоил производството на почти цялата линия на антивирусни лекарства директно действие, включително sofosbuvir с daklatasvirom и ledipasvir с velpatasvirom. Natco Pharma се появява през 1981 г. в град Хайдерабад с начален капитал от 3,3 милиона рупии, а броят на служителите е 20 души. Сега в Индия пет предприятия от Natko наемат 3500 души, а в други страни има и клонове. В допълнение към отделите за производство, компанията разполага с добре оборудвани лаборатории, които позволяват разработването на съвременни медикаменти. Сред собствените й разработки е да се отбележат лекарствата за борба с рака. Едно от най-известните наркотици в тази област е Veenat, произведено от 2003 г. и използвано при левкемия. Да, и освобождаването на генерични лекарства за лечение на вируса на хепатит С е приоритетна област за Natco.

    Хетеро Drugs Ltd.

    Тази компания се стреми да произвежда генерични лекарства, като подчинява това желание на своята собствена мрежа от отрасли, включително фабрики с клонове и офиси с лаборатории. Производствената мрежа Хетеро е лишена от свобода за производство на лекарства въз основа на лицензите, получени от компанията. Едно от направленията на дейността си са медицински препарати, което позволява да се справят с тежки вирусни заболявания, чието лечение за много пациенти стават невъзможни поради високата цена на оригиналните лекарства. Придобитият лиценз позволява на Хетеро да започне бързо да пуска генерични продукти, продавани на цена, достъпна за пациентите. Създаването на Hetero Drugs датира от 1993 г. През последните 24 години на територията на Индия се появиха десетина фабрики и десетки производствени единици. Като собствена лаборатория, позволява на компанията да извършва експериментална работа върху синтеза на вещества, които допринасят за разширяване на производствената база и износа на активни лекарства в чужди страни.

    Зидус Хептиза

    Зидус е индийска компания, която си поставя за цел създаването на здраво общество, което според собствениците му ще бъде последвано от промяна в по-доброто качество на живота на хората. Целта е благородна и, за да се постигне това, компанията провежда активни образователни дейности, засягащи най-бедните слоеве на населението на страната. Включително чрез безплатна ваксинация на населението срещу хепатит В. Zidus по отношение на продукцията на индийския фармацевтичен пазар е на четвърто място. В допълнение, 16 от неговите продукти са включени в списъка на 300 основни лекарства на индийската фармацевтична индустрия. Продуктите на Zydus са търсени не само на вътрешния пазар, а могат да се намерят в аптеките на 43 страни от нашата планета. Асортиментът от лекарства, произвеждани в 7 предприятия, надвишава 850 препарата. Едно от най-мощните му производствени съоръжения е в щата Гуджарат и принадлежи към най-големия не само в Индия, но и в Азия.

    HCV терапия 2017

    Режимите на лечение за хепатит С за всеки пациент се избират индивидуално от лекаря. За правилния, ефективен и безопасен избор на режима, лекарят трябва да знае:

    • генотип на вируса,
    • продължителността на заболяването,
    • степен на увреждане на черния дроб,
    • наличие / отсъствие на цироза, съпътстваща инфекция (напр. HIV или друг хепатит), отрицателен опит от предишно лечение.

    След като получи тези данни след извършване на цикъл от анализи, лекарят въз основа на препоръките EASL избира най-добрия вариант на терапията. Препоръките на EASL се коригират година след година и се добавят нови лекарства. Преди да препоръчат нови терапии, те се предават на Конгреса или на специална среща за разглеждане. През 2017 г. специалната среща на EASL разглежда обновяването на препоръчаните схеми в Париж. Решено е напълно да се спре използването на интерферон в лечението на HCV в Европа. Освен това не е имало препоръчителна схема, използваща само едно лекарство с директни действия. Ето няколко препоръчителни варианта за режими на лечение. Всички те са дадени само за справка и не могат да станат ръководство за действие, тъй като назначаването на терапията може да бъде дадено само от лекар, под чието наблюдение по-късно ще премине.

    1. Възможни схеми на лечение, предложени от EASL в случай на моноинфекция с хепатит С или съпътстваща HIV + HCV инфекция при пациенти, които нямат цироза и които не са били лекувани преди това:
    • за лечение генотипове 1а и 1Ь можете да използвате:

    # 8229, софосбувир + ledipasvir, без рибавирин, продължителност 29 седмици, # 8229, sophosbuvir + daklatasvir, също без рибавирин, периодът на лечение е 29 седмици, # 8229 или софасубувир + велапасвир без рибавирин, продължителността на курса е 29 седмици.

    • с терапия генотип 2 приложете без рибавирин в продължение на 29 седмици:

    # 8229, софосбувир + dklatasvir, # 8229 или sophosbuvir + velpathaswir.

    • в лечението генотип 3 без използване на рибавирин за период на лечение от 29 седмици:

    # 8229, sophosbuvir + daklutasvir, # 8229 или софасубувир + вепатасвир.

    • с терапия генотип 4 възможно е да се приложи без рибавирин в продължение на 29 седмици:

    # 8229, софосбувир + лидипасвир, # 8229, sophosbuvir + daklutasvir, # 8229 или софасубувир + вепатасвир.

    1. Препоръчителни режими на EASL терапия за моноинфекция на хепатит С или съпътстваща HIV / HCV инфекция при пациенти с компенсирана цироза, които не са лекувани преди това:
    • за лечение генотипове 1а и 1Ь можете да използвате:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir с рибавирин, продължителност 29 седмици, # 8229 или 24 седмици без рибавирин, # 8229 и друга опция - 24 седмици с рибавирин с неблагоприятна прогноза за отговора, # 8229, сафусбувир + даклутасвир, ако няма рибавирин, след това 24 седмици, а с рибавирин - период на лечение от 29 седмици, # 8229 или sofosbuvir + velpatasvir без рибавирин, 29 седмици.

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir без рибавирин в продължение на 29 седмици и при рибавирин за неблагоприятна прогноза от 24 седмици, # 8229 или sophosbuvir + velpathaswir без комбиниране с рибавирин в продължение на 29 седмици.

    # 8229, sophosbuvir + дакаласвир за 24 седмици с рибавирин, # 8229 или софасубувир + вепатасвир отново с рибавирин, периодът на лечение е 29 седмици, # 8229, като вариант е възможно софосбувир + велпатасвир 24 седмици, но вече без рибавирина.

    • с терапия генотип 4 прилагат същите схеми, както при генотипите 1а и 1Ь.

    Както можете да видите, резултатът от терапията се влияе от комбинацията от предписани лекарства, освен състоянието на пациента и характеристиките на тялото му. В допълнение, продължителността на лечението зависи от комбинацията, избрана от лекаря.

    Лечение със съвременни лекарства от HCV

    Вземете таблетки от препарати с директно антивирусно действие, които веднъж дневно се предписват от лекар перорално. Те не са разделени на части, не се дъвчат, измиват се с чиста вода. Най-добре е да се направи това по едно и също време, така че да се поддържа постоянна концентрация в тялото на активните вещества. За да се свържете с времето на прием на храна не е задължително, най-важното - не го правете на празен стомах. След като започнете да приемате лекарства, обърнете внимание на здравословното състояние, тъй като през този период е най-лесно да забележите възможни нежелани реакции. Самите те нямат много PDPD, но лекарствата, предписани в комплекса, са много по-малки. Най-често нежеланите реакции се проявяват като:

    • главоболие
    • повръщане и световъртеж,
    • обща слабост,
    • влошаване на апетита,
    • болка в ставите,
    • промени в биохимичните кръвни нива, изразени в ниско ниво на хемоглобин, намаляване на тромбоцитите и лимфоцитите.

    Нежелани прояви са възможни при малък брой пациенти. Но все пак всички съобщени заболявания трябва да бъдат съобщени на лекуващия лекар за предприемането на необходимите мерки. За да не се увеличават страничните ефекти, алкохолът и никотинът трябва да се изключат, тъй като те неблагоприятно засягат черния дроб.

    Противопоказания

    В някои случаи приемането на PDPD е изключено, а засяга:

    • индивидуална свръхчувствителност на пациентите към някои съставки на лекарства,
    • пациенти под 18-годишна възраст, тъй като няма точни данни за тяхното въздействие върху организма,
    • жените, носещи плода и кърмещите бебета,
    • жените трябва да използват надеждни методи за контрацепция, за да избегнат зачеването по време на терапията. И това изискване важи за жени, чиито партньори също са подложени на PADA терапия.

    Съхранявайте антивирусни лекарства за директно действие на места, недостъпни за деца, и последиците от пряката слънчева светлина. Температурата на съхранение трябва да бъде в диапазона от 15 ÷ 30 ° C. Когато приемате лекарства, проверете времето за тяхното производство и съхранение върху опаковката. Просрочените лекарства са забранени. Как да купите PPPD на руски граждани За съжаление, не можете да намерите индийски генерични лекарства в руските аптеки. Фармацевтичната компания "Галаад", която е издала лицензи за производство на препарати, разумно е забранила износа си в много страни. Включително всички европейски страни. Тези, които искат да купят бюджетни индийски генерици за борба с хепатит С, могат да се възползват от няколко начина:

    • да ги поръчате през руски онлайн аптеки и да получавате стоките за няколко часа (или дни) в зависимост от мястото на доставка. И в повечето случаи дори не се изисква авансово плащане,
    • да ги поръчате чрез индийски онлайн магазини с доставка вкъщи. Тя ще изисква предплащане във валута, а времето за изчакване ще продължи от три седмици до един месец. Освен това ще добавите необходимостта да общувате с продавача на английски,
    • отидете в Индия и донесете сами наркотиците. Това също ще отнеме време, плюс езикова бариера, както и сложността на проверката на оригиналността на стоките, закупени в аптеката. Към целия проблем на независимия износ, изискващ термо контейнер, наличието на заключение на лекар и рецепта на английски, както и копие от чека, също ще бъдат добавени.

    Тези, които се интересуват от закупуване на лекарства, решават сами кои от възможните варианти за доставка да изберат. Просто не забравяйте, че в случай на HCV, благоприятният резултат от терапията зависи от скоростта на нейното начало. Тук в буквалния смисъл забавянето на смъртта е сходно и следователно не е полезно да се забави началото на процедурата.