Анализът на кръвта на ТМС какво е това

Диети

Tandem масова спектрометрия (TMS) е един от съвременните методи за анализ на състав, който се използва широко за различни научни и практически цели. Този метод позволява да се анализират няколкостотин съединения в микро-количества от биологичен материал.

Къде се прилага този метод?

В световната практика на здравеопазването този метод се използва за масов скрининг на новородени за наследствени метаболитни заболявания (НБД). На мястото на изсушената кръв е възможно да се определят аминокиселини (включително фенилаланин) и ацилкарнитини. Количественото определяне на тези вещества прави възможно изключването на няколко десетки наследени заболявания, принадлежащи към различни класове NBO (метаболитни нарушения на аминокиселини, органични киселини и дефекти на митохондриалното β-окисление на мастни киселини). Според чуждестранни литературни данни тяхната обща честота е 1: 2000 живи новородени. Преди това голямо количество биологичен материал е било необходимо за диагностициране на тези заболявания, като се извършват няколко изследвания (аминокиселинен анализ, хроматографска масспектрометрия, определяне на спектъра на ацилкарнитин), което изискваше значително време и разходи за материали. TMS ви позволява да изчислите всички тези съединения по време на един анализ!

Какви заболявания могат да бъдат открити с този метод?

За съжаление все още не съществува универсално много чувствителен и специфичен тест за диагностициране на всички известни НБО, но технологиите, целящи да идентифицират няколко десетки или дори стотици заболявания в един анализ, вече стават реалност. TMS се прилага за такива методи. Този метод позволява да се идентифицира с висока надеждност около 40 наследствени метаболитни нарушения на аминокиселини, органични киселини и дефекти на митохондриалното бета окисление на мастни киселини. Повечето от тези заболявания се появяват през периода на новородените. Списък на заболяванията, които могат да бъдат диагностицирани с използването на тази технология, е даден в раздела за анализ http://labnbo.ru/prajs-list

Защо е необходимо диагнозата метаболитни заболявания възможно най-скоро?

Много лекари погрешно вярват, че НБО са толкова редки, че е необходимо да се изключат само на последно място и много често правилната диагноза се установява още на по-късна дата или изобщо не се диагностицира болестта.

Въпреки това, вече са известни повече от 150 форми на NBO, за които са разработени методи за ефективна терапия и колко зависи животът и здравето на пациента от това колко бързо и правилно се определя диагнозата. За 20 заболявания, които могат да бъдат диагностицирани с TMS, е разработено специално лечение. Доставена във времето диагностика - спасеният живот и здравето на пациента!

Правила за събиране на кръвни проби

Кръвта се събира върху стандартна филтърна карта (№ 903), която се използва за скрининг на новородени в PKU. Кръвта може да бъде капилярна (от пръста, петата) и венозна. Необходимо е да се импрегнира добре избраната област върху филтъра! На филтърната карта трябва да бъде ясно посочено името, кой и откъде е изпратен пациентът, датата на раждане и телефонния номер на лекуващия лекар. Пробата се изсушава 2-3 часа на въздух. Препоръчително е да добавите извлечение от медицинската история.

Пример за правилното събиране на кръвни проби:

Примери за неправилно събиране на кръвни проби:

Много малки петна

Пробата не беше изсушена до края, което доведе до замъгляване на пробата по време на транспортирането.

Филтърната хартия бе слабо импрегнирана с кръв.

Полезни връзки:

(NCBI) е информационен национален ресурс за молекулярна биология, основан през 1988 г. Базата данни PubMed съдържа над 15 000 000 статии от различни биомедицински списания (на английски език).

Каталогът на човешките гени и генетични заболявания, създаден от д-р В.А. Маккушик и колегите му (на английски език).

(SSIEM) - Сдружение за изследване на наследствени метаболитни заболявания (вродени метаболитни грешки).

Федерален държавен бюджет научна институция "Център за медицинска генетична наука"

Информационен портал за редки заболявания, възможности за тяхното лечение и диагностика при пациенти с редки заболявания

В цяла Руска общество за редки болести е създадено през 2012 г. по инициатива на пациенти, членове на техните семейства и експерти. Към днешна дата VOZ обединява повече от 400 пациенти от 47 региона на Руската федерация с 63 редки заболявания.

Анализът на кръвта на ТМС какво е това

През годините обикновено се извършваше скрининг тестове, специфични за всяка отделна болест. Например, скринингът на PKU се основава на микробиологична или химична оценка на увеличаването на фенилаланина.

Тази ситуация се е променила напълно през последното десетилетие с появата на тандемна мас спектрометрия технологии (TMS). Анализ на тандем мас спектрометрия (TMS) може не само точно и бързо откриване на повишена фенилаланин кръв място в новороденото с по-малко фалшиви положителни отговори, в сравнение с по-старите методи, но също така позволява да се открие едновременно няколко десетки други биохимични разстройства.

Някои от тях вече са били подложени на скрининг индивидуални тестове. Например, много държави са използвани специфични тестове за откриване на повишена метионин, за откриване на тандем мас спектрометрия (TMS) също не надежден метод за скрининг-onatalnogo някои заболявания съответните критерии за проверка, но не са имали надежден тест преди.

Например, Недостатък на MCAD - окисляване на мастна киселина разстройство обикновено асимптоматични, но клинично установима когато пациентът се увеличава катаболизъм. Откриване на дефицит MCAD при раждането може да се окаже жизненоважно като болни деца имат много висок риск от животозастрашаваща хипогликемия в ранна детска възраст с катаболни състояния, причинени от по-kurrentnymi заболявания, като вирусна инфекция.

Почти една четвърт от децата с недиагностициран недостатък на MCAD умират при първия епизод на хипогликемия. При правилното лечение може да се постави метаболитно разстройство. С недостиг на MCAD главната цел на скрининга е да предупреди родителите и лекарите за риска от метаболитна декомпенсация, тъй като децата между атаките са практически здрави и не се нуждаят от ежедневно лечение, с изключение на продължителното гладуване.

Въпреки това използването на тандемна масова спектрометрия (TMS) за неонатален скрининг остава под въпрос. В допълнение към осигуряването на бързо тестване на много разстройства, неонатален скрининг, за които вече се прави или може да бъде оправдано, тандем мас спектрометрия (TMS) и идентифицират деца с вродени метаболитни нарушения като метилмалонова acidemia, обикновено не са включени в програмата за скриниране поради тяхната рядкост и трудността за осигуряване на крайна терапия, която предотвратява прогресивното неврологично влошаване.

Заболявания, открити с тандемна масова спектрометрия

I. Aminoatsidemii:
- PKU
- Болест на урината с миризмата на кленов сироп
- хомоцистинурията
- Tsitrullinemiya
- Аргинин-янтарна киселинност
- Тирозинемия тип I

II. Органична киселинност:
- Пропионова киселина
- Метилмалонова ацидемия
- Изовалерична ацидемия
- Изолирана 3-метил-кротонилглицинемия
- Глутарна ацидемия (тип I)
- Дефицит на митохондриална ацетоацетил-коА-тиолаза
- Хидроксиметилглутарова киселина
- Неадекватност на множество CoA карбоксилази

III. Нарушения в окисляването на мастни киселини:
- Недостатъчно SCAD
- Дефицит на хидрокси-SCAD
- Недостатъчно MCAD
- Недостатъчно VLCAD
- Липса на LCAD и недостатъчност на трифункционален протеин
- Глутарна ацидемия тип II
- Недостатъчност на карнитин-палмитоилтрансфераза II

Тандем масова спектрометрия (TMS) могат също да идентифицират анормални метаболити с несигурна здравна стойност. Например SCAD дефицитът е друго заболяване на окисляването на мастни киселини, най-често асимптоматично, въпреки че някои пациенти могат да имат трудности, свързани с епизодична хипогликемия. По този начин прогнозната стойност на положителния резултат от анализа на тандема масова спектрометрия (TMS) за симптоматичен SCAD е вероятно да бъде много ниска.

Дали предимството на откриването е по-голямо Недостатъчност на SCAD отрицателен ефект на теста, причиняващ неоправдано безпокойство на родителите, при повечето новородени с положителен резултат от теста, които никога не са показали клинични симптоми? По този начин, не всяко заболяване, открито чрез метода на тандемна масспектрометрия (TMS), отговаря на критериите за неонатален скрининг.

Ето защо някои експерти система шоуто на здравеопазването, че родителите и лекарите трябва да се докладват само за отклонения в метаболити с доказан клиничен ефект. Други застъпник на използването на цялата информация, предоставена от тандем мас спектрометрия (TMS), и предлагат да информират лекарите и родителите на всички необичайни метаболити, без значение колко е добър на критериите за болестни отговарят на стандарт неонатален скрининг. По-късно, можете да наблюдавате внимателно при пациенти с нарушения на неизвестен стойност. Поради всички тези причини, използването на тандем мас спектрометрия (TMS) за скрининг новородени и остава предмет на дебат.

за популационен скрининг в предитния период обикновено се използват два теста: хромозомен анализ при по-възрастни жени и AFP на серум на майката или тройно изследване за DNT и хромозомна анеуплоидия.

Ако бременност компрометирана поради ин - инвазивни процедури за пренатална диагностика на хромозомни анеуплоидии, дължащи се на възрастта на майката, също трябва да предлагат допълнителна проверка, например определяне на нивото на АФП в околоплодната течност, целия геном търсене за сравнителна хибридизация опасни подмикроскопичните заличавания, мутации скрининг за кистозна фиброза и други общи заболявания.

Анализът на кръвта на ТМС какво е това

Tandem масова спектрометрия е един от съвременните методи за анализ на състав, който се използва широко за различни научни и практически цели. Този метод позволява да се анализират няколкостотин съединения в микро-количества от биологичен материал. В световната здравна практика този метод се използва за масов скрининг на новородени за наследствени метаболитни заболявания (НБД). На мястото на изсушената кръв е възможно да се определят аминокиселини (включително фенилаланин) и ацилкарнитини. Количественото определяне на тези вещества позволява изключването на няколко десетки наследствени заболявания, принадлежащи към различни класове NBO (метаболитни нарушения на аминокиселини, органични киселини и дефекти на митохондриалното б-окисление на мастни киселини). Преди това голямо количество биологичен материал е било необходимо за диагностициране на тези заболявания, като се извършват няколко изследвания (аминокиселинен анализ, хроматографска масспектрометрия, определяне на спектъра на ацилкарнитин), което изискваше значително време и разходи за материали. TMS ви позволява да изчислите всички тези съединения по време на един анализ! Наследствените нарушения на метаболизма на аминокиселини, органични киселини и дефекти на митохондриалното бета окисление на мастни киселини имат около 100 нозологични форми, повечето от които се проявяват в новородения период. Тяхната честота е повече от 1: 5000 живи новородени. Много лекари погрешно вярват, че болестите в тази група са толкова редки, че е необходимо да ги изключим само на последно място и много често правилната диагноза е установена вече на по-късна дата или изобщо не е диагностицирана.

По време на анализа 52 показателя (аминокиселини и ацилкарбиний)

Изпитвателен материал: кръвна капиляра в суха форма

Подготовка за проучването: не

Приемни дни: по време на работното време на медицинския център

№ НБО1, Проверка на новородени. "Пета" (анализ на спектъра на аминокиселините и ацилкарнитините)

  • Подобни случаи на болестта в семейството.
  • Случаи на внезапна смърт на дете в ранна възраст в семейството.
  • Силно влошаване на състоянието на детето след кратък период на нормално развитие (асимптоматичният интервал може да варира от няколко часа до няколко седмици).
  • Необичайна миризма на тялото и / или урина ("сладка", "мишка", "варено зеле", "потни крака" и т.н.).
  • Неврологични нарушения - психични разстройства (летаргия, кома), различни видове конвулсивни атаки, промени в мускулния тонус (мускулна хипотензия или спастична тетрапареза).
  • Нарушения в ритъма на дишането (брадисти, тахипнея, апнея).
  • Нарушения от други органи и системи (увреждане на черния дроб, хепатоспленомегалия, кардиомиопатия, ретинопатия).
  • Промени в лабораторните параметри на кръвта и урината - неутропения, анемия, метаболитна ацидоза / алкалоза, хипогликемия / хипергликемия, повишена активност на чернодробните ензими и нива на креатин киназата, Кетонурия.
  • Допълнителна диагноза на 37 наследствени метаболитни заболявания, заедно със задължителната държавна програма за откриване на 5 наследствени заболявания: скрининг на новородени: "ПИАТОЧКА".

Тълкуването на резултатите от изследването съдържа информация за лекуващия лекар и не е диагноза. Информацията от този раздел не може да се използва за самодиагностика и самолечение. Точната диагноза се прави от лекаря, като се използват както резултатите от това изследване, така и необходимата информация от други източници: анамнеза, резултатите от други проучвания и др.

Единици в лабораторията INVITRO: μmol / литър.

ЛАБОРАТОРИЯ НА ХЕРЕДИТАРНИТЕ ЗАБОЛЯВАНИЯ НА ОБМЕН НА ВЕЩЕСТВА

Показания за анализ на TMS

Клиничната диагноза на вродени метаболитни нарушения на аминокиселини, органични киселини и дефекти на митохондриалното б-оксидация може да доведе до определени трудности, тъй като тези заболявания нямат специфични специфични признаци и симптоми. Ето защо изследването на всички пациенти от новородени патологични отделения, детски отдели за интензивно лечение може да помогне за бързото откриване на тези наследствени заболявания.

Показания за изследване на ацилкарнитини и аминокиселини чрез TMS са:


7. Промяна на кръвта и урината - тромбоцитопения, неутропения, анемия, метаболитна ацидоза / алкалоза, хипогликемия / хипергликемия, повишени чернодробни ензими и нива на креатин киназата, Кетонурия.

Генетични тестове

Момичета, ние невролог изпратихме до генетиката (тя каза, че церебралната парализа не е наша диагноза, въпреки че тя я отведе в санаториума за лечение). Кажи ми, кой е изправен пред това, колко е приблизително? Още не знам за какво ще ни изпратят, но бих искал да знам какви количества да подготвя, не е общ кръвен тест...

Мобилно приложениеЧестита мама 4.7 Комуникацията в приложението е много по-удобна!

Не мога да кажа. всичко може да бъде. и всичко е различно по различни начини

Предадохме много от всичко! Кариотипът от 4000 рубли., TMS 4000 рубли amminokisloty урина 4 пъти (10000 рубли за всички), amminokisloty кръвта 4 пъти, също около 10 000 рубли, 12000 рубли синдром Драве, лактат много пъти, не евтини консултации генетика и какво ли не "зало- Малки неща. "Генетичен преглед не е евтин!

Мултистероиден кръвен тест: определяне на жизнените човешки хормони на качествено ново ниво

Терминът "мултистероиден анализ" се отнася до определянето на профила на стероидни хормони по метода на хроматографска масова спектрометрия. Цялата част от резултатите от този анализ се обозначава с термина "стероиден профил". По същество това са два еквивалентни термина, обозначаващи едно и също нещо.

Multisteroidny анализ - вътрешен развитие, техника на анализ валидирани и сертифицирани като "метод (метод) за измерване на концентрацията на масата на стероидни хормони в кръвни проби чрез течна хроматография -. Тандем мас спектрометрия Mus 08-47 / 376", регистрирана в регистъра Rosstandart под номер FR.1.31.2015.21875.

Понастоящем анализът на многоелементите не е включен в списъка с тестове, одобрени от Министерството на здравеопазването на Руската федерация и се извършва като част от научно изследване. Самите пациенти са принудени да плащат разходите за този анализ. Провеждат се действия, за да се гарантира, че в бъдеще тези разходи ще бъдат покрити от застрахователна медицина.

Количествено определяне на основните стероидни хормони и серумни метаболити или слюнчената референтен метод течност - газ хроматография-тандем мас спектрометрия (в литературата този метод е също така по-нататък LC-MS / MS) - труден и скъп процедура. Основна характеристика на метода е възможността да се определят всички декларирани аналитите в един анализ (Фиг. 1), обаче, въз основа на определяне на стойността на аналит получава едва вероятно не по-малко от алтернативни имунохимични методи.

Фигура 1. Анализи, определени по време на един анализ, съгласно процедурата

Защо името на техниката представя наименованието на биоматериал "кръв"?

За да се разграничи веднага от широко известния анализ на "стероидния профил на урината". Трябва да се отбележи, че съдържанието на информация за анализ на урината е доста различен и изисква различно третиране, съдържащо се в урината до голяма степен неактивни форми на стероиди: сулфати, глюкурониди и хидроксилирани производни имат нежелан организъм, и извежда от тях. В кръвта се определят концентрациите на активните форми на стероидни хормони, които циркулират в системата на общото кръвоснабдяване, влизат в клетките и имат сигнализиращ ефект върху генома.

При какви заболявания е определението на показания за стероиден профил на кръвта, на кого лекарите стероидният профил на кръвта ще помогне с диагнозата?

1. Всички видове вродена дисфункция на надбъбречната кора (VDKN). VDKN е вродено заболяване, което се проявява в нарушаването на биосинтеза на стероиди. Това се дължи на нарушение на функционирането на един от 5-те ензими на надбъбречната кора. Това може да бъде дефицит 21а-хидроксилаза (CYP21) и 11б-хидроксилаза (CYP11B1). Традиционните методи новородени скрининг VDKN имуноанализ често дават фалшиво-положителни резултати при определянето на 17-хидроксипрогестерон. Следователно, във всички спорни случаи е необходима потвърждаваща диагноза чрез LC-MS / MS [1]. Диагностика на некласически форми VDKN (NF) VDKN иму методи представя значителни трудности, така че често не NF VDKN диагностицира чрез неонатален скрининг, но се усеща по-късно: при юноши появява растеж преждевременно коса, акне; момичета - хирзутизъм, менструална дисфункция, репродуктивни нарушения. За стероид профил, когато NF VDKN характеризира с повишена 21-дезоксикортизол и 17-ОН-прогестерон, обаче multisteroidny анализ комбинира с генетични изследвания е изключително полезно за диагностициране на заболяването.

2. Надбъбречна недостатъчност. За целта се провежда стимулиращ тест с АСТН и се измерват нивата на кортизола, алдостерона и 11-дезоксикортизола: основен, 30 и 60 минути след стимулирането. При първична надбъбречна недостатъчност алдостеронът не реагира на стимулацията, докато при вторична недостатъчност се регистрира повишаване на нивото му. В контролната група нивото на 11-дезоксикортизол се увеличава 15-20 пъти в отговор на стимулирането на ACTH, а кортизолът - приблизително 3 пъти [2].

3. Хипогонадизъм при мъжете. За правилна диагноза на хипогонадизма при мъжете е необходимо да се определи точното ниво на общия тестостерон (ТТ), използвайки мас спектрометрия. В проучване на 10 000 доброволци е установено, че диагнозата хипогонадизъм може да бъде направена, ако концентрацията на КТ е под 12,1 nmol / L според масспектрометрията [3].

4. Контрол на субституиращото лечение при мъже и жени (ХЗТ). За тези пациенти мас спектрометрия е "златен стандарт", тъй като тя позволява да се избере точната терапевтична доза на хормон (или стимулатор) следа подробно реакцията на всички метаболити в заместителна терапия и да се избегнат смущения, присъщи имунохимични методи [4-6].

5. Много е важно да наблюдавате нивата на стероидни хормони по време на бременност и в рамките на една година след раждането. Многостероидите предоставят много по-точна информация за статута на андроген в сравнение с традиционния DHEA-сулфат.

6. Гинекология. "Вирулизиращи" (андроген-продуциращи) надбъбречни тумори имат активност, предизвикваща андроген, и предизвикват развитие на вирилен синдром при жените. Установено е, че почти всеки хормонално активен тумор на яйчниците може да бъде източник на прекомерното производство на андрогени и / или естрогени и трябва да бъдат диагностицирани като се използва метод на тандем масспектрометрия [7].

7. Диабет. Това заболяване засяга нервната система и засяга концентрацията на невростероиди. LC-MS / MS дава възможност да се определят концентрациите на невроактивни стероиди, за да се разработят нови подходи при лечението на диабетна нефропатия [8].

8. Спортна медицина. Профилът на стероидите на спортистите в кръвта и слюнката може да предостави важна информация за здравословното им състояние, атлетичната форма, да контролира хода на обучението, благодарение на оптималното разпределение на товарите.

Мултистероидният анализ едва ли ще стане жив сами по себе си, като се има предвид широкото разпространение на методите за имунологично изследване и устойчивостта на привържениците на традиционните технологии. Но зад този метод е бъдещето, той вече е признат за най-добрите представители на медицинската наука [9].

Какво е ALS

Амиотрофичната латерална склероза е най-честата форма на моторно невронно заболяване, което е невродегенеративно заболяване, което засяга моторните неврони в мозъка и гръбначния мозък

Диагностика на ALS

Симптомите на ALS могат да се различават за различните хора, тъй като заболяването има индивидуален характер и процент на прогресия.

Амиотрофичната латерална склероза е изключително трудна за диагностика по няколко причини:

  • това е рядко заболяване;
  • ранните симптоми са сравнително леки, като тромавост, неловкост в ръцете или леко вискозна реч, с всички по-горе може да бъде резултат на напълно различни причини;
  • болестта засяга всеки човек по различен начин, няма определен симптом, който ясно се определя от ALS.

Ако терапевтът подозира, че пациентът има ALS, той трябва да го насочи към невролога. Тогава човек може да има поредица от диагностични изследвания, които могат да бъдат извършени както в болнични, така и в болнични.

Кръвен тест

Изследванията ще покажат дали нивото на креатин киназата е повишено в кръвта. Този ензим се получава, когато мускулната тъкан бъде унищожена и нейното ниво може да се увеличи при хора, страдащи от ALS. Този показател обаче не е специфичен признак на ALS, тъй като може да бъде показател за други заболявания.

Електронеумиография (ENMG)

При ENMG, тънки игли се използват за записване на нервните импулси в отделните мускули. Записването обикновено се извършва от всяка крайница и булбарните (фарингеални) мускули. Мускулите, които са загубили инервацията, се откриват, защото тяхната електрическа активност е различна от активността на здравите мускули. Резултатите от ENMG може да се различават от нормалните, дори ако специфичният мускул все още не е засегнат от заболяването.

При ENMG се проверява и скоростта на импулса по дължината на нервните влакна. За тази цел електрически импулс преминава през малък уплътнител в контакт с кожата. Това е много важен диагностичен метод за изследването.

Транскраниална магнитна стимулация (TMS)

Това е нов метод, който може да се изпълнява едновременно с ENMG. Той е предназначен да оцени състоянието на моторните неврони на мозъка. Резултатите от TMS могат да помогнат при диагностицирането.

Магнитен резонанс (MRI)

MRT може да открива увреждане на нервната система, причинено от инсулт, болестта на Алцхаймер, болестта на Паркинсон, множествена склероза, тумори и увреждания на гръбначния мозък. MRT не разкрива конкретни промени в ALS, тъй като вредите, причинени от тази болест, не се отразяват в снимките. Този метод на изследване се използва за изключване на заболявания със симптоми, подобни на ALS.

Други методи

Неврологът може да реши да извърши допълнителни изследвания като лумбална пункция или мускулна биопсия, ако нещо показва тяхната нужда. Но тези изследвания не винаги се използват при диагностицирането на ALS.

Прилагане на тандем
мас спектрометрия (HPLC-MSMS)
в клиничната диагноза

Масспектрометрия - е перспективата за развитието на клиничната химия, едно бъдеще, в което революция в клинична диагноза ще доведе до широко разпространеното използване на мас-спектрометрия.
(Майкъл Улерих, Катедра по клинична химия, Университет Джордж Август, Гьотинген, Германия)

Според проучване, публикувани в клинични отзива биохимик, използване на високоефективна течна хроматография в комбинация с тандемна мас спектрометрия (HPLC-MS / MS) в клинични лаборатории се е увеличил значително през последните 10-12 години. Авторите отбелязват, че анализът на специфичност чрез HPLC-MS / MS е значително по-широка имунологични методи и класически високоефективна течна хроматография (HPLC) за анализ на молекули с ниско молекулно тегло и има значително по-висока производителност от газова хроматография-мас спектрометрия (GC-MS). Популярността на този метод в рутинните клинични анализи сега се обяснява с уникалните възможности на метода.

    Основните предимства на метода HPLC-MS / MS са:

  • Възможността за точен количествен анализ на малките молекули;
  • Едновременни анализи на комплекта целеви съединения;
  • Уникална специфичност;
  • Високоскоростен анализ.
  • През последните години се отделя голямо внимание на времето на анализа и в резултат на това се увеличава лабораторната производителност. стана възможно значително намаляване на времето анализ чрез използване на по-къси колони за аналитична HPLC / MS / MS едновременно рязко повишаване на специфичността на анализа. Използването на атмосферно налягане йонизация (API), тандем троен квадруполен масспектрометър и подобрен течна хроматография с висока производителност, и свързаните с тях методи за подготовка на пробите доведе HPLC-MS / MS в първите редове на съвременните аналитични методи за клинични проучвания.

      Основни приложения на HPLC / MS / MS в клиничната медицина:

  • Получаването на пълен метаболитен профил на стероиди (панели), пурини и пиримидини и други съединения,
    скрининг на новородени за вродени метаболитни грешки (откриване на няколко десетки болести за един анализ);
  • Терапевтичен мониторинг на лекарства - имуносупресори, антиконвулсанти, антиретровирусни, антикоагуланти и други - независимо от наличието на комплектите на производителя. Не е нужно да купувате скъпи комплекти за всяко вещество - можете да разработите свои собствени методи;
  • Клинична токсикология - анализ на над 500 наркотични съединения и техните метаболити в един анализ, без потвърждаващ анализ
    протеомика и метаболомика.
  • В допълнение, HPLC IUMI използва за скрининг на урината oligosaharidove sulfatide dlinotsepochechnyh мастни киселини dlinotsepochechnyh жлъчни киселини, метилмалонова киселина, проучвания порфирия, за скрининг на пациенти с нарушения на метаболизма на пурин и пиримидин.

    Примери за течна хроматография
    в комбинация с тандемна масова спектрометрия при клинични анализи.

    Прожекция на новородени: Първият пример за масово приложение на HPLC-MS / MS в клиничната диагностика е скринингът на вродени метаболитни грешки при новородени. Понастоящем в развитите страни това е рутинен метод и обхваща повече от 30 различни заболявания, включително ацеталдехид, аминокиселина, окислителни дефекти на мастни киселини. Специално внимание трябва да се обърне на изследвания на вродени дефекти, които могат да доведат до сериозни проблеми, ако не бъдат предприети незабавни мерки (напр. Разширено сърце или черен дроб или оток на мозъка). Предимството на използването на HPLC-MS / MS за скрининг на новородени е възможността едновременно да се анализират всички аминокиселини и ацилкарнитини чрез бърз, евтин и много специфичен метод.

    Терапевтичен мониторинг на лекарствени продукти: Разработването и прилагането на имуносупресивен сиролимус (рапамицин) за предотвратяване на отхвърляне на орган след трансплантация е един от основните стимули за въвеждането на HPLC-MS / MS в клиничните лаборатории. Съвременният HPLC-MS / MS метод позволява едновременно определяне на такролимус, сиролимус, циклоспорин, еверолимус и микофенова киселина.

    HPLC-MS / MS се използва за тестове за цитотоксичност, антиретровирусни лекарства, трициклични антидепресанти, антиконвулсанти и други лекарства, които изискват индивидуална дозировка.

    Методът HPLC-MSMS позволява да се отделят и количествено определят R- и S-енантиомерите на варфарин в концентрационния диапазон 0.1-500 ng / ml.

    Наркотични и аналгетични вещества: HPLC-MS / MS се използва широко за анализ на тези съединения, поради простотата на подготовката на пробата и краткото време за анализ. Понастоящем методът се използва в клинични лаборатории за скрининг за наличието на широк спектър на наркотични вещества. Уникалната специфичност и чувствителност на метода дава възможност да се анализират едновременно повече от 500 съединения от различни класове в една проба с минимална подготовка на пробите. По този начин, в случай на анализ на урината, простото разреждане на пробата е 50-100 пъти. При анализа на косата вместо на пакет 100-200 косми, една коса е достатъчна за надеждно откриване на фактите за консумация на наркотици.

    Ендокринология и стероиден анализ: HPLC-MS / MS е широко използван в много лаборатории за анализ на ендокринни стероиди - тестостерон, кортизол, алдостерон, прогестерон, естриол, както и много други.

    Все повече и повече лаборатории започват да използват HPLC-MS / MS, за да определят нивата на витамин D3 и D2 в кръвта.

    I. Определяне на стероиди (стероиден профил).

    Лабораториите в болниците и клиниките в момента имат възможност едновременно да определят няколко стероида чрез HPLC / MS / MS. Това не изисква голям обем на пробите, което е особено важно при анализа на детските проби.

      Случаи, при които е препоръчително да се направи определение на няколко (профилиране) на стероиди:

  • Вродена надбъбречна хиперплазия (вродена надбъбречна хиперплазия, CAH) е вроден дефект стероид биосинтеза. Тази група от генетични заболявания, причинени от неправилна ензимна активност на кората на надбъбречната жлеза, което води до намаляване на производството на кортизол. За надеждна диагноза на SAN се препоръчва да се определят кортизол, андростендион и 17-хидроксипрогестерон. HPLC / MS / MS позволява точно количествено определяне на всичките три стероида в един анализ със 100% сигурност.
  • Рутинният скрининг на новородени, използващи имуноанализи, се характеризира с високо ниво на положителни и фалшиви отрицателни резултати. Определяне чрез HPLC / MS / MS не само кортизол и алдостерон но и 11-дезоксикортизол за разграничаване първична надбъбречна недостатъчност от средното.
  • HPLC / MS / MS позволява определяне на стероиди при простатит и синдром на хронична болка в таза.
  • HPLC-MS / MS ви позволява да определите профила на стероидите и да определите причините за преждевременно пубертета, свързани с надбъбречната кора на малките деца. Установено е, че концентрациите на тестостерон, андростендион, дехидроепиандростерон (DHEA) и неговия сулфат при тези деца са били малко по-високи, отколкото при по-големите деца от контролната група.
  • Серумните активни пушачи, пасивни пушачи и непушачи, се анализират за присъствието на 15 стероидни хормони и хормони на щитовидната жлеза за изучаването на връзката между пациенти, изложени на дим и концентрациите на хормоните.
  • HPLC / MS / MS се използва при профилирането на някои женски стероидни хормони в урината.
  • Използвайки HPLC / MS / MS, концентрациите на невроактивни хормони бяха оценени, за да се предотврати диабетна невропатия.
  • II. Определяне на тиреоидни хормони

    Рутинните методи за определяне на хормоните на щитовидната жлеза обикновено се базират на радиоимуноанализ, който е скъп и позволява да се определят само ТЗ и Т4, което може да ограничи способността за определяне и пълно регулиране на функцията на щитовидната жлеза.

    • В момента се използва HPLC IUMI едновременен анализ се извършва в пет проби от серум хормони на щитовидната жлеза, включително тироксин (Т4), 3,3 ', 5-трийодотиронин (Т3), 3,3', 5'(RT3), 3, 3'diiodotironin (3,3'-Т2) и 3,5-diiodotironin (3,5-Т2) в концентрационен обхват 1 -500 нг / мл.
    • Методът HPLC / MS / MS се използва също така за анализ на хормоналния състав на пациентите, подложени на тиреоидектомия. Измерват се нивата на концентрации на тироксин (Т4), трийодотиронин (Т3), свободен Т4 и стимулиращ хормон (TSH) щитовидната жлеза след операцията. Установено е, че HPLC / MS / MS е отличен начин за установяване на връзката между TSH и концентрациите на тиреоиден хормон.
    • Методът HPLC / MS / MS се използва за определяне на тироксин (Т4) в човешката слюнка и серум. Методът се характеризира с висока възпроизводимост, точност и граница на откриване от 25 pg / ml. Проучванията показват, че има диагностична зависимост в концентрациите на Т4 в слюнката между пациенти с еутироиди и пациенти с болестта на Грейвс.

    Методът HPLC / MS / MS в момента има чувствителност, специфичност и точност, необходими за надеждно определяне на всички стероиди в биологичните течности и по този начин подобрява диагностичните способности, особено при определяне на стероиди.

    III. Определяне на 25-хидроксивитамин D чрез HPLC / MS / MS

    25-хидрокси витамин D (25OD) е основният циркулиращ форма на витамин D и неговите активни форми прекурсори. (1,25-дихидроксивитамин D). Поради дългия полуживот, определението за 25OD е важно за определяне състоянието на витамин D в тялото на пациента. Витамин D съществува в две форми: витамин D3 (холекалциферол) и витамин D2 (ергокалциферол). И двете форми се метаболизират в съответните 25OD форми. Много важно за диагностика е наличието на аналитични методи, които могат да определят с висока точност, двете форми на витамин и позволява наблюдение на пациенти с нарушения на витамин D. прилаганите методи все още не позволяват отделно определяне на витамин D2 и D3. В допълнение, при високи концентрации на витамин D2, откриваемото количество D3 е подценено. Друг недостатък е използването на радиоактивни изотопи. Прилагане на HPLC / MS / MS е възможно не само да се избегне използването на радиоактивни изотопи, но също така да се проведе отделно определяне на двете активни форми на витамин.

        Методът е приложим за следните пациенти:

  • Ако има съмнение за понижено съдържание на витамин D в организма;
  • Ако има съмнение за необясним токсичен ефект;
  • При изследване на пациенти, подложени на лечение за понижено съдържание на витамин D;
  • Използването на HPLC / MS / MS позволи отделно определяне на двете форми при мониториране на пациентите.
  • IV. Определяне на имуносупресори чрез HPLC / MS / MS

    След трансплантация на органи, е необходимо да се вземат имуносупресори през целия живот, за да се избегнат реакциите на отхвърляне. При много тесен терапевтичен диапазон и висока токсичност, имуносупресорите изискват индивидуална дозировка, за да се постигне максимален ефект. Поради това е жизненоважно да се наблюдават основните имуносупресори: циклоспорин А, такролимус, сиролимус и еверолимус за регулиране на дозата на лекарството за всеки отделен пациент, в зависимост от концентрацията на лекарството в кръвта.

    Имуноанализът все още се използва за мониторинг на изброените лекарства, но тези методи са скъпи и тяхната специфичност, точност и възпроизводимост са ограничени. Има случаи на смърт на пациенти поради неправилно дозиране на имуносупресори въз основа на резултатите, получени чрез имунологични методи. Понастоящем имуноизследванията се заменят в клинични лаборатории чрез HPLC / MS / MS. Така в клиниката на университета в Мюнхен се анализират ежедневно около 70 проби за съдържанието на сиролимус и циклоспорин А, използвайки система HPLC / MS / MS. Цялата подготовка на пробите и контрола на устройството се извършва от един служител. Лабораторията също преминава към анализ на такролимус по този метод.

    • Използва се HPLC / MS / MS за рутинното едновременно определяне на такролимус, сиролимус, аскомицин, деметоксисиролимус, циклоспорин А и циклоспорин Ж в кръвта. Диапазонът се определя от концентрацията от 1.0 - 80.0 ng / ml. За циклоспорин 25 до 2000 ng / ml. През годината в лабораторията бяха анализирани над 50 000 проби.
    • Тъй като беше установено, че едновременното прилагане на такролимус и сиролимус дава положителен терапевтичен ефект, е разработен прост и ефективен метод за HPLC / MS / MS за отделно определяне на кръвта за клинични анализи. Анализът на една проба отнема 2,5 минути с точност 2,46% -7,04% за такролимус и 5,22% -8,30% за сиролимус за цялата аналитична крива. Долната граница на определяне на такролимус е 0,52 ng / ml, сиролимус - 0,47 ng / ml.

    V. Определяне на хомоцистеин чрез HPLC / MS / MS

    Хомоцистеинът е интерес в сърдечно-съдови заболявания (тромбоемболизъм, болест на сърцето, атеросклероза) и други клинични състояния (депресия, болест на Алцхаймер, остеопороза, усложнения на бременността, и др.). Съществуващите методи за анализ на хомоцистеин, включително имуноанализ, са скъпи. Разработен бързо HPLC метод / MS / MS за анализ на хомоцистеин за рутинно клинично приложение при анализа на голям брой проби. Йонизацията се извършва чрез електроспрей. Методът е възпроизводим, много специфичен и точен. Предимствата на метода са и ниската цена на реагентите и простотата на подготовката на пробите. В рамките на един ден е възможно да се анализират 500 или повече проби.

    заключение

    Трябва да се отбележи, че въпреки че използваните понастоящем значително подобрени методи за имуноанализ, поради технически ограничения по принцип, този метод никога няма да имат сравнима точност HPLC IUMI и специфичност към целева субстанция, по-специално в присъствието на метаболити. Това води не само до ниска точност на метода ELISA и висок процент на неверни положителни и фалшиво-отрицателни резултати, но не позволява да се сравняват резултатите, получени при различни клинични катедри, като се използва метод ELISA. Прилагане на HPLC-MS / MS елиминира този недостатък, позволява високо специфична, точна и бърз анализ на голям брой проби с висока надеждност в присъствието на метаболити и няма намеса от придружаващи и ендогенни вещества в плазма и кръв на пациенти.

    Въпреки очевидната висока цена на инструменталния комплекс, както свидетелства световната практика, при правилна експлоатация комплексът плаща само за 1-2 години. Това се дължи главно на ниската цена на един анализ, дължащ се на едновременния анализ на десетки и стотици връзки и липсата на необходимост от закупуване на скъпи диагностични комплекти. Освен това, лабораторията има възможност самостоятелно да развие необходимите техники за анализ и да не зависи от производителя на комплектите.

    Изборът на правилната конфигурация на арматурното табло

    Има много различни методи на мас-спектрометрия и видове масови спектрометри, предназначени за решаване на различни проблеми - структурната идентификация на комплекс тегло протеинови макромолекули в стотици хиляди Далтона до рутинни висока пропускателна количествен анализ на малки молекули.

    За успешното разрешаване на задачата едно от основните условия е изборът на подходящ тип оборудване. Няма универсално устройство, което да позволява решаването на целия спектър от аналитични проблеми. По този начин инструмент, разработен за решаване на проблема с идентифицирането на микроорганизми, не е в състояние да анализира количествено малките молекули. И обратното. Факт е, че въпреки общото име, това са абсолютно различни устройства, които работят на различни физически принципи. В първия случай този масов спектрометър с лазерен източник на йонизация - MALDI-TOF, а във втория - тройна квадрупола с електроспрей йонизация - HPLC-MSMS.

    Вторият най-важен параметър е изборът на правилната конфигурация на системата. Съществуват няколко големи производителя на масово спектрометрично оборудване. Устройствата на всеки производител имат не само своите собствени силни страни, но и слабости, които обикновено предпочитат да мълчат. Всеки производител произвежда собствена линия от устройства. Цената на един аналитичен комплекс е в диапазона от 100 000 до 1 000 000 долара или повече. Избирането на оптималния производител и правилната конфигурация на оборудването не само ще спести значителни финансови ресурси, но и ще решава по-ефективно задачата. За съжаление, има много примери, при които лабораторното оборудване е било направено без да се вземат предвид тези фактори. Резултатът е неактивно оборудване, изгубени пари.

    Третият фактор, определящ успешната работа на лабораторията, е персоналът. Масспектрометрите изискват висококвалифициран персонал. За съжаление, в нито един университет в Русия няма курс на съвременна практическа масова спектрометрия, особено по отношение на клиничните приложения, а задачите за обучение на персонала на всяка лаборатория трябва да бъдат решени сами. Естествено, 2-3 дни обучение за запознаване, проведено от производителя след стартирането на оборудването, не е достатъчно, за да разбере основата на метода и да придобие умения за работа с устройството.

    Четвъртият фактор е липсата на готови техники за анализ. Всяка лаборатория има свои собствени приоритети, за чието решение е необходимо да се разработят техни собствени методи. Това може да се направи от лице, което има поне 2 до 3 години опит в работата с устройството. Производителите на фирми понякога предлагат един или два общи метода на препоръка, но не ги адаптират за конкретни задачи на лабораторията.

    В BioFarmExpert LLC специалисти с дългогодишен опит в различни видове масспектрометри, както и разработването на техники и определянето на високопроизводителни анализи. Следователно предоставяме следните услуги:

    1. Избор на оптимална конфигурация на устройството за конкретни задачи на клиента.
    2. Закупуване, доставка и пускане в експлоатация на оборудване на водещи производители на тандем масови спектрометри. Постепенно обучение на персонала в рамките на една година от момента на стартиране на оборудването.
    3. Комплект от готови техники и бази данни за решаване на основни клинични проблеми.
    4. Разработване на аналитични техники и решаване на конкретни задачи на клиента в неговата лаборатория с участието на неговия персонал.
    5. Методическа подкрепа на всички етапи на работа.

    Кръвен анализ с предварителна дериватизация (TMS-производни)

    Двуизмерна газова хроматография - време на полета масова спектрометрия за анализ на кръвна плазма с предварителна дериватизация (производни на TMS), които показват определяне на глюкозата 5TMS

    Анализът на метаболитите в кръвната плазма чрез двуизмерна газова хроматография - време на полета масова спектрометрия с предварителна дериватизация (производни на ТМС) демонстрира откриването на 5TCS глюкоза с магнитуд 901 съвпадения.

    Предишна Статия

    AST и ALT

    Следваща Статия

    Фиброза в черния дроб