Антитяло IgG за денатурирана (едноверижна) ДНК (анти-ss ДНК IgG)

Захранване

Антитела към едноверижна (денатурирана) ДНК (анти-ssDNA) - автоантитела, които се произвеждат, когато човешката имунна система не е в състояние да разграничи свои собствени и чужди клетъчни компоненти.

АНТИ-едноверижна ДНК произвежда в системен лупус еритематозус (SLE), склеродерма, и ревматоиден артрит, както и много други не-ревматични заболявания. Антителата към едноверижна (денатурирана) ДНК са много неспецифични и могат да бъдат открити в различни патологии. Освен това, антитела срещу двойноверижна ДНК може да реагира кръстосано с едноверижни имуноглобулини, което прави трудно тълкуването на резултатите от анализа.

Нивото на антитела към едно-верижна ДНК е определено да оцени тежестта на системния лупус еритематозус, както и за изследователски цели.

Симптомите на СЛЕ включват ставна болка, обрив, умора, нарушена бъбречна функция. Най-често системният лупус еритематозус се регистрира при жени на възраст от 15 до 40 години. Причината за болестта остава неясна, но се предполага, че има генетично предразположение към СЛЕ.

Едно от сериозните усложнения на СЛЕ е лупусният нефрит, който се характеризира с тежко възпаление на бъбреците. Луфусният нефрит води до появата на протеини в урината, повишено кръвно налягане и бъбречна недостатъчност.

Този анализ позволява да се идентифицират антитела към едноверижна (денатурирана) ДНК. Анализът помага при диагностицирането на системния лупус еритематозус.

метод

Имуно-ензимен анализ - ELISA.

Референтните стойности са норма
(Антитела към едноверижна (денатурирана) ДНК (анти-ssDNA), количествена кръв)

Информацията относно референтните стойности на показателите, както и състава на показателите, включени в анализа, може да се различава леко в зависимост от лабораторията!

Антитела към едноверижна ДНК (a-ssDNA)

Антитела към едноверижна ДНК - един вид антинуклеарни специфични имуноглобулини, насочени срещу денатурирани ДНК молекули. Анти-ssDNA се определя при 70-80% от пациентите със системен лупус еритематозус, но тяхното производство не е специфично за това заболяване. Анализът се използва за наблюдение на СЛЕ, откриване на лупус-нефрит. Дефиницията на антитела от класа IgM се използва за комплексното диагностициране на лекарствения лупус. От вената се взема кръв, нивото на АТ се определя чрез метода ELISA. Нормалният резултат е "отрицателен", по-малък от 20 IU / ml. Условията на теста са 1 ден.

Антитела към едноверижна ДНК - един вид антинуклеарни специфични имуноглобулини, насочени срещу денатурирани ДНК молекули. Анти-ssDNA се определя при 70-80% от пациентите със системен лупус еритематозус, но тяхното производство не е специфично за това заболяване. Анализът се използва за наблюдение на СЛЕ, откриване на лупус-нефрит. Дефиницията на антитела от класа IgM се използва за комплексното диагностициране на лекарствения лупус. От вената се взема кръв, нивото на АТ се определя чрез метода ELISA. Нормалният резултат е "отрицателен", по-малък от 20 IU / ml. Условията на теста са 1 ден.

Антинуклеарните АТ се продуцират от В-лимфоцити, когато имунната система реагира на фрагменти от клетъчните ядра на своя собствен организъм като чужди агенти. Системата на комплемента се активира, възниква възпаление, уврежда се автоимунната тъкан. Антителата към едноверижна ДНК са неспецифични, продуцирани при много заболявания, най-често в злокачествени форми на СЛЕ, склеродермия, ревматоиден артрит. Ниската специфичност на проучването ограничава употребата му за диагностициране на автоимунни патологии, но сравнително високата чувствителност към СЛЕ (до 80%) го прави възможно да се използва като инструмент за наблюдение на състоянието на пациентите.

свидетелство

Производството на анти-ssDNA е най-характерно за ревматични заболявания. Показания за изследването:

  • Системен лупус еритематозус. Анализът се дава на хора с установена диагноза, за да се оцени тежестта на заболяването, да се определи естеството на курса, да се идентифицира рискът от развитие на лупус нефрит. Високите титри са характерни за злокачествена форма, значителна вероятност за увреждане на бъбреците.
  • Лечебен лупус-подобен синдром. Тестът е показан за пациенти, приемащи прокаинамид, хидралазин, изониазид, триметадион, метилофу, фенотиазини. Тя се извършва с цел диагностициране във връзка с изследването на антинуклеарни антитела.

Подготовка за анализ

Анти-ssDNA се открива в серума на венозна кръв. Изпробването на биоматериали се извършва сутрин. Подготовката на процедурата за доставка има съвещателен характер, включва редица ограничения:

  1. За една седмица трябва да обсъдите с Вашия лекар необходимостта от отмяна на вашите лекарства.
  2. За един ден - да се въздържат от пиене на алкохол, извършване на тежки физически усилия. Необходимо е да се избегне влиянието на стресови фактори.
  3. За 4-6 часа - да се въздържате от хранене. Допуска се да се пие още вода.
  4. За половин час - да се откажат от пушенето.
  5. Семинарите по физиотерапия, инструменталните изследвания трябва да се провеждат след даване на кръв.

Кръвта се взема от улналната вена, в запечатани епруветки се доставя в лабораторията. Биоматериалът се центрофугира, фактори на кръвосъсирването се получават от отделената плазма. Серумът се подлага на ензимен имуноанализ. Извършването на цялата процедура и подготовката на данните отнема 1 ден.

Нормални стойности

Резултатът в нормата е отрицателен. То съответства на концентрация на анти-ssDNA от 0 до 20 IU / mL. Референтните стойности не зависят от възрастта и пола. При тълкуването е важно да се вземат предвид редица коментари:

  • При мониториране на СЛЕ, отрицателен резултат е благоприятен прогностичен признак, което показва нисък риск от развитие на луфурен нефрит.
  • Ниското ниво / липса на специфични имуноглобулини не изключва лупус-подобен синдром, причинен от приемането на медикаменти. Чувствителността на метода е 50%.

Увеличение на

Ниска специфичност на метода се проявява чрез множество заболявания, при които нивото на АТ е повишено. Причините за отклонението на крайната стойност от нормата:

  • Системен лупус еритематозус. В активната фаза на заболяването, увеличаването на нивата на глобулина се определя при 78-80% от пациентите, в неактивната фаза - при 40-43%. Най-високите стойности се наблюдават при злокачествена форма с увреждане на бъбреците.
  • Синдром на лекарствения лупус. Отклонението от тестовата стойност се открива при 50% от пациентите.
  • Системна склеродермия. При екзацербация честотата на повишаване на концентрацията на анти-ssDNA е 50%, с ремисия от -30%.
  • Ревматоиден артрит. Тежките форми се придружават от увеличаване на резултата от теста в 35% от случаите.
  • Други ревматични заболявания. Концентрацията на глобулините нараства на фона на дифузните лезии на съединителната тъкан, васкулита, ставните заболявания.
  • Инфекции, левкемия. Увеличаването на показателя се наблюдава на фона на хепатит, инфекциозна мононуклеоза, остра миелогенна левкемия, лимфоцитна левкемия.
  • Индивидуални функции. Анти-ssDNA се среща при 4% от здравите хора.

Лечение на аномалии

Най-разпространеният тест за антитела срещу едноверижна ДНК е получен като метод за мониториране на СЛЕ и откриване на луфурен нефрит. Диагностичната значимост на изследването е незначителна. Тълкуването на резултата и назначаването на лечението се извършва от ревматолог, дерматоневролог, по-рядко от нефролог, терапевт.

Антитела към нативна ДНК

Когато има нарушение на имунната регулация, тялото развива неуспехи. Ранното диагностициране на състоянието на тялото е важно, идентифициране на промените в кръвта, трябва да се разглежда като вид чужди тела, както и динамиката на растежа им. Те са насочени срещу ДНК, ядрото на молекулата се премества в периферията и данните от изследването се провеждат, за да се определи заболяването.

Откриване на промяната в молекулите

Антитяло на нативна ДНК може да бъде открито чрез различни методи на разпространение, то е голям процент. Те се срещат при хора, страдащи от инфекциозни заболявания. Понякога те се появяват на пръв поглед при здрави хора, но обременени с наследственост, развиват се често в ранна възраст. Явлението на клетката е засегнато, образува се нуклеинова киселина. След откриване на промени в структурата на молекулата на здравите хора, след пет години обикновено развива лупус еритематозус. Има промени в кожата и бъбречната функция е нарушена. Идентификацията в серума е свързана с активността на процеса или може да предположи прогноза. Положителният резултат се потвърждава от данните от проучването.
Ефектът на лекарствата е страничен ефект на лекарствения лупус. Синдромите могат да предизвикат наркотици, на фона на приемането на фенитоин, такива лекарства като хинидин, хлорпромазин, хидралазин. Премахването на лекарството намалява нивото на чуждите тела. През целия период от шест месеца се наблюдава пълно изчезване на серума.
При системни повреди на организъм се развиват антитела, насочени към нативна двойноверижна ДНК. В същото време, имунитетът се влошава, бъбреците, мозъка, кръвоносните съдове се възпаляват и увреждат. Съдовите увреждания са пряко свързани, с незаменимото наличие на лезия на съединителната тъкан, засягат възрастни хора, вероятно със сензорни невропатии.

Молекулни изследвания

Антитела срещу нативна ДНК може да се определи чрез провеждане на диагноза на SLE е необходимо да се направи ензимен имуноанализ, че под наем в един ден. Проучването се провежда 2, 5 часа. Приготвянето на анализа не се изисква, приема се на празен стомах, няма специални ограничения в режима на хранене. След венпункция кръвта се събира в стъклен флакон. Анализът се извършва със серум от венозна кръв, който се пречиства от пептиди и протеини. Извършва се твърдофазов ензимно-свързан имуносорбентен анализ.
Ако има високо съдържание на чужди включвания в серума, това означава лупусен нефрит. Положителното изследване е основата за диагностициране на СЛЕ. Важно е създаването на външно включване, което показва нарушение в работата на ДНК. За потвърждаване на положителен резултат се провеждат допълнителни изследвания. Серийното задаване на анализите се извършва за оценка на лечението. Лекарят назначава дерматолог, нефролог, дерматолог.

Разнообразие от диагностика

Нуклеозомата се образува чрез комбиниране на ДНК нишки с хистонови протеини, които са част от хромозомата. Ядрата се открива при септични условия, онкологични заболявания и пациенти със СЛЕ. При апоптозата, ендонуклеозата се разкъсва от ДНК и нуклеозомите навлизат в кръвоносната система.

Положителните резултати от анализа присъстват при повечето пациенти с лупус и пациенти, страдащи от нефрит. Те взаимодействат с циклин протеин, който се разпада след клетъчното делене. При 3% от пациентите с лупус еритематозус се откриват промени. Специфичността на автоантитела към PCNA за SLE е 99%. При лупус еритематозус се откриват засягане на ЦНС и тромбоцитопения.
Автоантитела на рибозомните протеини са силно специфични за СЛЕ. Наблюдава се при пациенти с хепатит, с нарушение на централната нервна система, при пациенти с психози.

Антителата към рибонуклеопротеините са подсемейство на ANA, често се срещат в SLE.
При по-агресивен курс на лупус заболяване, лезиите на ЦНС показват наличието на Sm антитела. Разпространение от 5 до 40%.

Една трета от пациентите с признаци на прогресивна склероза или полимиозит, има антитела към U1-nRNP. Болестта се нарича синдром на Шарп.
При СЛЕ, автоантитела срещу СС възникват при тежки симптоми на кожни прояви. Такива пациенти са фоточувствителни към излъчване на ултравиолетови вълни. Пациентите се характеризират с продължителността на лечението.
При дифузна склеродермия се появяват антитела срещу топоизомераза. Антицентрометричните включвания не се появяват при здрави хора, развива се синдром на Raynaud, когато се откриват такива антитела.

Пациентите с антитела срещу PM-Scl изискват специално внимание към работата на белите дробове - белодробна фиброза и фиброзен алвеолит. Анти-митохондриални антитела М2 присъстват при пациенти с жлъчен цистит.
При пациенти, страдащи от склеродермия, ревматични заболявания, са налице антитела срещу Ro-52.
Предвид разнообразието от изследвания, историята на заболяванията се основава на резултатите. Имунните разстройства засягат увреждането на кожата, кръвоносната система, съединителната тъкан, бъбреците, ставите и други органи. Фракциите на лупусния антикоагулант могат да провокират прогресията на хеморагичния синдром. Наличието на чужди тела в кръвта се променя с хода на заболяването. Голям брой показва прогресивно заболяване. Но тази последователност не винаги се случва. Повишено ниво е характерно за лекарствения лупус, инфекциите с хепатит В и С.

Резултатът е активно повлиян от ефективната терапия, загуба на контрол по време на лечението. Важно е да се подчертае, че откриването на отрицателен резултат не гарантира диагностицирането на СЛЕ. Откриването на външни микрочастици, без клинични промени, не е основа за диагностициране. Необходимо е внимателно да се вземе предвид състоянието на здравето, да се проведе имунологичен преглед. Има много нарушения на тялото, които не се проявяват по никакъв начин, понякога се оказва, че е твърде късно да се лекуваме. За да поддържат здравословен ум и здраво тяло, лекарите препоръчват провеждането на медицински прегледи ежегодно.

125, IgG антитела към двойно-верижна (нативна) ДНК (анти-dsDNA IgG, анти-двойноверижни (нативни) ДНК IgG антитела, анти-dsDNA IgG)

Тълкуването на резултатите от изследването съдържа информация за лекуващия лекар и не е диагноза. Информацията от този раздел не може да се използва за самодиагностика и самолечение. Точната диагноза се прави от лекаря, като се използват както резултатите от това изследване, така и необходимата информация от други източници: анамнеза, резултатите от други проучвания и др.

* крайният срок не включва деня на вземане на биоматериал

Имунохемилуминесцентни (CLIA), количествени

В тази секция можете да разберете колко изпълнението на изследването в града ви, прочетете описанието на теста и тълкуването на таблицата с резултатите. Изборът къде да се тества "IgG антитела срещу двойноверижна (роден) ДНК (анти-dsDNK IgG, анти-двойноверижна (местни) ДНК IgG антитела, анти-античЬДНК IgG)» в Москва и други руски градове, не забравяйте, че разходите за анализ, разходите за процедурата за вземане на биоматериали, методите и времето за изследване в регионалните медицински кабинети може да се различават.

Антитела към едноверижна ДНК (анти-ssDNA), IgG

Изследване за откриване на антитела в едноверижна (денатурирана) ДНК в кръвта, което може да се използва за диагностициране и оценка на активността на фокалната склеродермия.

Руски синоними

Антитела към едноверижна ДНК, имуноглобулини от клас G;

Антитела към денатурирана ДНК;

Синоними английски

Антитяло към ss-ДНК;

Денатурирано едноверижно ДНК антитяло;

ДНК антитяло с едноверижна ДНК.

Метод на изследване

Имуноензимен анализ (ELISA).

Мерни единици

U / ml (единица на милилитър).

Какъв биоматериал може да се използва за изследване?

Как да се подготвим правилно за проучването?

  • Не пушете 30 минути преди теста.

Обща информация за проучването

Антитела на едноверижна ДНК (анти-едноверижна ДНК) принадлежат към групата на антинуклеарни антитела, т.е. автоантитела, насочени срещу компоненти на собствените си ядра. Антигени за анти-едноверижна ДНК са азотни бази, нуклеотиди и нуклеозиди, състоящи се от едноверижна ДНК. В кръвта, повечето хора не могат да открият анти-едноверижна, който принадлежи към класа IgM антитела. Анти-ssDNA клас IgM нямат независима диагностична стойност. За разлика от анти-едноверижна ДНК IgG клас характеристика на много системни заболявания на съединителната тъкан, такива като системен лупус еритематозус, ревматоиден артрит, полимиозит / дерматомиозит, и други. Най-често анти-едноверижна ДНК се наблюдава при пациенти с локализирана склеродермия. Тези антитела трябва да бъдат разграничени от антитела към двойно-верижен, нативната ДНК (анти-двДНК), които свързват една двойка бази, нуклеозиди и нуклеотиди, състоящи се от двойноверижна ДНК.

Анти-ssDNA се открива при 50% от пациентите с различни форми на фокална склеродермия. Фокалната склеродермия се характеризира с ограничена фиброза на кожата и подкожната мастна тъкан, но понякога може да включва мускулна и костна тъкан. За разлика от системната склеродермия прогнозата на заболяването е благоприятна, тъй като фокалната склеродермия никога не засяга вътрешните органи, а феноменът Рейно не се наблюдава. За диференциална диагноза на фокална и системна склеродермия може да се изследва концентрацията на анти-ssDNA. Тези антитела са по-характерни за локализирана, фокална склеродермия. Специфична особеност на системната склероза е наличието на анти-Scl-70. Важно е да отбележим, че отрицателният резултат от изследването на анти-ssDNA не елиминира напълно диагнозата "фокална склеродермия".

Изследването на анти-ssDNA има най-голяма диагностична стойност в педиатричната дерматология. Най-честата форма на фокална склеродермия при децата е линейната склеродермия (ен преврат де сабя). Така фиброза настъпва линейно по дължината на крайника, в челната област, или заедно пакета невроваскуларните. С развитието на дълбоката атрофия, включваща мускулните структури, болестта придобива неспособен характер. Показано е, че пациенти с склеродермия линейна форма висока концентрация на анти-едноверижна ДНК се свързва с участието на мускулната тъкан, така проучване на концентрациите на тези автоантитела може да се използва за оценка на прогнозата на болестта.

Нивото на анти-ssDNA отразява активността на фокалната склеродермия. Най-високата концентрация на тези автоантитела се намира в общата форма на фокална склеродермия. Когато се постигне ремисия на заболяването, концентрацията на антителата намалява и резултатът от анализа може да стане отрицателен. По тази причина може да се използва изследване на концентрацията на анти-ssDNA за контролиране на лечението на заболяването.

Трябва да се отбележи, че наличието на анти-ssDNA не е строго специфичен признак на фокална склеродермия. В допълнение, тези автоантитела могат да бъдат открити в кръвта на здрави хора. Поради тази причина положителният резултат от анализа не винаги означава наличието на болестта. Интерпретацията на анализа се извършва, като се вземат предвид допълнителните клинични, лабораторни и инструментални данни.

За какво се използва изследването?

  • За диференциална диагностика на фокална и системна склеродермия;
  • Да се ​​оцени активността и прогнозата на фокалната склеродермия.

Кога е възложено изследването?

  • Ако симптомите на локализирани склеродермия: ограничени валежи под формата на твърдо в плаките, докосване или зони на атрофия на кожата, придружени от загуба на всички видове чувствителност в огнището.

Какво означават резултатите?

Референтни стойности: 0 - 20 U / ml.

В това проучване се определя концентрацията на антитела. Ако е по-малко от 20 U / ml, тогава резултатът е "норма", ако е по-голям - резултатът е "увеличено съдържание".

  • фокална склеродермия;
  • системен лупус еритематозус;
  • лекарствен лупус;
  • ревматоиден артрит;
  • дерматомиозит / полимиозит;
  • Синдром на Sjogren;
  • askulity;
  • неспецифичен улцерозен колит и болест на Crohn;
  • смесено заболяване на съединителната тъкан.
  • норма;
  • опрощаване на заболяването;
  • неправилно вземане на проби от биоматериали за изследвания.

Какво може да повлияе върху резултата?

  • Ефективната терапия и постигането на ремисия на заболяването са свързани с нисък титър на анти-ssDNA.

Важни бележки

  • Отрицателният резултат от изследването не позволява да се изключи диагнозата "фокална склеродермия";
  • анти-ssDNA може да се наблюдава при здрави индивиди;
  • тълкуването на резултата от изследването трябва да се извърши, като се вземат предвид допълнителните клинични и лабораторни данни.

Препоръчва се също

[13-007] Антитела към двойноверижна ДНК (анти-dsDNA), скрининг

[13-046] Антитела към екстрахируемия ядрен антиген (екран ENA)

[13-015] Антитела към ядрени антигени (ANA), скрининг

[13-063] антинуклеарни антитела (анти-SM, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-SCL, PCNA, CENT-B, Jo-1, хистони, нуклеозоми, RiboP, AMA-M2), имуноблот

[13-045] Анти-ядрен фактор върху HEp-2 клетки

[13-077] Диагноза полимиозит (антитела към Mi-2, Ku, Pm-Scl, antisintetaznye антитяло (Jo-1, PL-7, PL-12))

[13-019] Антифосфолипидни антитела IgG

[13-013] Антифосфолипидни антитела IgM

[13-059] Проверка на заболяванията на съединителната тъкан

[13-061] Диагностика на антифосфолипидния синдром (APS)

[13-060] Диагностика на системния лупус еритематозус

Кой определя изследването?

Дерматовенеролог, ревматолог, педиатър, общопрактикуващ лекар.

литература

  • Hahn BH. Антитела към ДНК. N Engl J Med. 1998 7 май; 338 (19): 1359-68.
  • Takehara К, Sato S. Локализираната склеродермия е автоимунно разстройство. Ревматология (Оксфорд). 2005 Mar; 44 (3): 274-9.
  • Кавануг А, Томар Р, Ревейл J, Соломон Д.Х., Хомбургер ХА. Насоки за клиничната употреба на теста за антинуклеарни антитела и тестове за специфични автоантитела тунуклеарни антигени. Американски колеж по патолози. Arch Pathol Lab Med. 2000 Яну; 124 (1): 71-81.
  • Mutasim DF, Адамс ВВ. Практическо ръководство за серологична оценка на автоимунни заболявания на съединителната тъкан. J Am Acad Dermatol. 2000 Feb; 42 (2 Pt 1): 159-74; тест 174-6.

Антитела към денатурирана ДНК

Нарушаването на функционалната активност на Т и В лимфоцитите се отразява в развитието на различни форми на имунодефузия.

Системен лупус еритематозус (SLE) и ревматоиден артрит (RA) - хронично автоимунно заболяване (AID) с неясна етиология и обширна картина на имунопатогенезата, намаляване на качеството и продължителността на живот на населението, следователно, са сред главните биомедицинска и социални проблеми [4; 3].

Пациентите със SLE се характеризират с повишаване на нивото на IgG-AT към nDNA, които имат ДНК-хидролизираща активност [4; 5] и вероятно са участници в патологичния процес. Но досега няма консенсус сред изследователите относно приноса на АТ към nDNA за развитието и напредъка на АИХ.

При RA има също така повишаване на нивото на ДНК-хидролизиращите антитела, но клиничните признаци се различават от SLE [3; 7]. Следователно, ходът на патологичния процес може да бъде определен не само от нивото на AT към ДНК, но и от техните свойства, които се различават при различните AIZ.

Последните проучвания показват, че някои ATs на ДНК проникват в клетките и засягат вътреклетъчните процеси [9].

Може да се предположи, че IgG-антитела срещу двДНК, взаимодействащи с ДНК на клетките и променят структурата на хроматина, водят до нарушаване на апоптоза на имунни клетки, което води до увеличаване на апоптотична материал и по време на неговото движение в кръвообращението, което се наблюдава в SLE и изостря автоимунен процес.

Целта на работата е да се изследва генотоксичността на клас IgG антитела към нативна ДНК в първичната култура на здрави лимфоцити.

Материали и методи на изследване

разпределяне IgG-AT към nDNA от човешки серум

Всички етапи на пречистване на изолирането и пречистването на IgG-AT от nDNA от донорни серуми и SLE и RA пациенти са проведени съгласно предварително разработена процедура [4]. Ние използвахме антитела към ДНК кръвен серум на жени - 20 серуми от здрави донори, 7 серуми на пациенти, страдащи от SLE и 20 серума от пациенти с RA време на обостряне на болестта, в резултат на лечебни заведения на Казан. Диагнозата на SLE и RA е направена от квалифицирани ревматолози на GOU DPO "Казанската държавна медицинска академия на Федералната агенция за здравеопазване и социално развитие".

Изолиране на лимфоцити от пълноценна кръв на здрави индивиди се провеждат съгласно стандартната процедура за вертография на фикол - плътност от 1,077 mg / ml [10].

Култивиране на лимфоцити в присъствието на IgG-AT към nDNA

Към клетките (2 • 10 4 клетки / ямка) се разрежда с пълна среда RPMI-1640 рН 7.4 (Gibco, Шотландия), допълнена с 10% топлинно-инактивиран зародишен говежди серум, 2 тМ глутамин ( «Serva», Германия), 100 U / мл пеницилин (Русия), 100 мкг / мл стрептомицин (Русия) се добавя пречистените IgG-антитела срещу двДНК субфракция до крайна концентрация от 1 мкг / мл. Всеки експеримент се повтаря три пъти. Клетките се инкубират при 37 ° С, 0.5% СО2 в рамките на 72 часа.

Общ брой и брой жизнеспособни лимфоцити след изолиране от цяла кръв и инкубиране с субфракции на IgG-AT с nDNA се определя чрез изключване на trypan blue.

Определяне на нивото на увреждане на ядрените ядрени клетки след култивиране с субфракции на IgG-AT към nDNA се извършва чрез флуоресцентна спектрофотометрия чрез промяна на интензитета на флуоресценцията на лимфоцитния хроматинов комплекс на EB-ДНК [2].

Определяне нивото на увреждане на ядрената ДНК чрез гел електрофореза на лизирани единични клетки - "ДНК комета"

В FSB беше използван 1% разтвор на агароза с ниска точка на топене (Fermentas, Canada). На предметно стъкло, покрити с полилизин ( «ApexLab», Русия) се прилага 60 ул от агарозен гел с клетки (2 • 10 април - 5 • 10 април), равномерно разпределени и се оставят в продължение на 30 минути при 20 ° С Клетъчен лизис (10 mM Tris-HCI рН 10, 2.5 М NaCl, 100 mM EDTA-Na2, 1% Triton Х-100, 5% DMSO, +4 ° С) се провежда в продължение на 1 час. След това чашите се прехвърлят в електрофорезен буфер (300 mM NaOH, 1 mM EDTA-Na2, рН> 13, +4 ° С) и се оставя да престои 20 минути. Електрофорезата се провежда 20 минути при 1 V / cm и 300 тА. Накрая, препаратите се прехвърлят в разтвор за фиксиране (70% етилов алкохол) в продължение на 15 минути, след което се сушат при + 20 ° С (1-2 часа). Като положителна контрола се използват ДНК клетки, инкубирани за 5 минути при -20 ° С в присъствието на 100 цМ Н, за да се визуализира разграждането на ДНК2ох2. Препаратите се оцветяват с акридин оранж (20 пг / мл) за 30 минути и се анализират върху флуоресцентен микроскоп (Axioscope А1, «Sarl Zeiss», Германия) с подходящи филтри (възбуждане филтър 490 нм, дихроично огледало 510, гранична филтър от 530 пМ), увеличението на 40x.

Статистическа обработка на данните

От получените данни, измененията в жизнеспособността и интензитета на флуоресценцията на ЕВ-ДНК клетки са изчислени на медианата, 97,5 и 2,5 перцентила при използване на стандартната програма Excel 2003 Office, като допълнително се използва Dunnett критерий [1].

РЕЗУЛТАТИ ОТ НАУЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ И ДИСКУСИЯ

Увеличава се нивото на ДНК-хидролизиращия АТ при СЛЕ и РА, но клиничната картина на заболяванията се различава [4; 7]. Предполага се, че IgG-антитела срещу двДНК са индуктори и участниците на възпалителния процес в ПОМОЩТА, но което определя тяхната патогенен потенциал и как се осъществява в тялото, не е напълно изяснен.

Следователно, за да се разбере по-добре ролята на антитела срещу двДНК в индуцирането и развитието на автоимунен синдром се оценява зависимост генотоксичност IgG-антитела срещу двДНК от техните физико-химични и имуно-химични свойства.

От всеки серум се получава 4 субфракция свободни имунни IgG-AT комплекси на двДНК различен заряд (част I, характеризиращ се с цялостен положителен заряд и фракции II с общ отрицателен заряд) и афинитет за двДНК - субфракция и се елуира с двДНК-целулоза буфер, съдържащ 1М NaCl, и б суб-фракции елуирани от сорбент буфер Gly-HCl рН 2.3, което позволява да се направи предположението за техния висок афинитет за антигена.

Показано е, че в присъствието на положително заредени IgG-антитела за донори двойно верижни ДНК намалява общия брой и броят на жизнеспособните лимфоцити в сравнение с контрола (PBS) (Фигура 1). IgG-антитела срещу двДНК при пациенти, страдащи от SLE, в острата фаза на заболяването, което имат подобен ефект върху най-донорни лимфоцити от здрави хора, но ефектът е по-силно изразено, вероятно поради тяхната висока ДНК хидролизиране активност.

Липса на клинични признаци донор на подобно въздействие върху клетъчни IgG-антитела към донорите двойно верижни ДНК и пациенти на SLE в острия стадий на заболяването се дължи на факта, че нивото на IgG-антитела към античЬДНК в кръвта на здрави хора е значително по-ниска, отколкото при пациенти със СЛЕ. Освен това, повечето от IgG-антитела срещу двДНК в кръвта на здрави индивиди се състои от имунни комплекси с идиотипни антитела [4] или отрицателно заредени биополимери, подобни на структурата на ДНК.

Процесът на изолиране IgG-антитела срещу двДНК на серуми е унищожаването на имунни комплекси с ДНК-AT образуване на свободни антитела срещу двДНК, но експерименти върху лимфоцити, ние използвахме равна концентрация на тестваните антитела, при което се получава възможност да се наблюдава потенциал отрицателен ефект върху клетки в витро AT донори.

Фиг. 1. Промяна в общия брой и количество на жизнеспособните лимфоцити на здрави индивиди след 72 часа инкубация при 37 ° С в присъствието на субфракции IgG-AT към nDNA:

La - положително зареден ниско-афинитетен IgG-AT към nDNA;

IIa - отрицателно зареден ниско-афинитетен IgG-AT към nDNA;

Ib - положително зареден високо афинитетен IgG-AT към nDNA;

IIb - отрицателно зареден високо афинитетен IgG-AT към nDNA.

Вероятно патологичният SLE-AT към nDNA може да произхожда от естествени АТ, изпълняващи защитни функции в организма, но въпросът за причините за такова аномално превключване остава отворен.

За пръв път беше показано, че спектърът на цитотоксични субфракции на IgG-AT към nDNA в серумите на пациенти с РА се различава от нормалния и SLE. Наред с положително заредени ниско афинитетни антитела към ДНК характеристика на донори и пациенти с SLE, с висок афинитет на положително и отрицателно заредени субфракции на IgG антитела при пациенти двДНК RA доведе до значително намаляване на броя на жизнеспособни и пролиферация на лимфоцити от здрави индивиди в витро.

Хроматиновото кондензиране на лимфоцитите след излагане на субфракции на IgG-AT към nDNA беше изследвано чрез флуоресцентна спектрофотометрия. Образуването на прекъсвания в ДНК води до декомпенсиране на хроматина, увеличаване на свързващите места на ЕВ с нуклеинова киселина и повишаване на флуоресценцията на EB-ДНК комплекса [2].

Освен това, генотоксичността на IgG-AT към nDNA се оценява чрез ДНК комета. В присъствието на прекъсвания в ДНК, структурната организация на хроматина се разрушава и супервисокото изчезва, което води до отпускане на молекулите. В електрическото поле отпускащите бримки и ДНК фрагментите се простират към анода, което придава на наблюдаваните обекти появата на "комети". По дължината и структурата на "опашката на кометите" може да се прецени степента на разграждане на клетките на ДНК.

Увеличение на флуоресцентната интензивност на комплекса на DL-ДНК в пробите, инкубирани с положително заредени-IgG антитела срещу двДНК (la, lb) донори, което показва клетки хроматинова структура промяна ДНК - премахване на супернавиване и възможно образуването на прекъсвания (Таблица 1). В типичните микрографии обекти след инкубиране на клетките с положително заредени IgG-антитела към образуване на двойноверижна ДНК се открива "комета опашки" (Фигура 2В), които не се наблюдават в негативната контрола с PBS (Фиг. 2А) и е отражение на генотоксичност АТ към ДНК. Вероятно някои ДНК свързване при донор, проникващ в клетките, може да достигне до ядрото, се свързва с ДНК и да променят своята конформация. Например, е показано, че АТ в ДНК свързващо място значително увеличава разрушаването му от хидроксилни радикали [8]. Евентуално, антитела срещу двДНК допринасят за окислително разграждане двДНК чрез промяна на нейната структура, като достъпна за хидроксилни радикали рестрикционни сайтове.

Таблица 1 - Промяна във флуоресцентното ниво на ЕВ-ДНК хроматина на лимфоцити след 72 часа инкубация при 37 ° С със субфракции IgG-AT към nDNA

субфракция

IgG-AT към nDNA

Интензитет на флуоресценцията на ЕВ-ДНК комплекса, единици / клетка

Антитела към денатурирана ДНК

Проблемът с множествената склероза (МС) се дължи на годишното увеличение на броя на хората, страдащи от това заболяване. Изследването на причините за появата, развитието и лечението на този изключително сериозен CNS за значимостта на болестта е една от водещите места в неврологично практика [5], като приоритет за съвременната медицина. Множествената склероза е клинично хетерогенно хронично демиелинизиращо заболяване на нервната система с неизвестна етиология. В MS концентрацията на IgG се увеличава, при която специфични антитела (АТ) се откриват срещу различни миелинови компоненти; Антинуклеарни антитела към ДНК, антитела към други структури и тъкани на тялото са открити [3]. Патогенното и клиничното значение на тези антитела не е достатъчно проучено. През последните години е доказано, че антитела към нативна и денатурирана ДНК могат да играят роля в развитието на множествена склероза. Честотата на тези антитела е значително по-висока при пациенти с неблагоприятни разбира заболяване [2] и също така се отнася и за динамичен контрол на активната фаза на [1] заболяване, което показва тясна връзка с генерирането AT основните етапи от развитието на болестта. антинуклеарни нива на антитела, може да варира значително в зависимост не само на имунореактивността на отделния пациент от характера и стадия на заболяването, но също така и като автоимунен отговор действителност двете роден и денатурирана ДНК [1].

В MS, има вдлъбнатина разрушителни процеси, които могат да се проявят в повишаване на ендогенен интоксикация спектър характеризира със средно молекулно тегло. Това са вещества от протеин произход с молекулно тегло 300-5000 далтона (DA), във връзка с които техните молекули често се нарича вторична маса (MSM) или средни молекулни пептиди (SMP) [6]. МСМ стана известен като важен универсален фактор на интоксикация. Определянето на МСМ с различен характер в кръвния серум на умствени и неврологични пациенти е информативно [7].

Разрушителните процеси основната неспецифично ендогенен интоксикация, обикновено свързани с активирането на оксидативен стрес, и са придружени от смущения на структурата и функцията на мембрани [14]. Натрупване на MSM е не само маркер endotoksikatsii, но също утежняващ фактор за патологичния процес - придобиване на ролята на вторични токсини, те причиняват заболяване на кръвно-мозъчната бариера, микроваскулатурата, инхибират митохондриални процеси на окисляване, нарушават транспорт на аминокиселини [6]. Това показа почти пълно отделяне на окисление и фосфорилиране, нарушена честота на дишане регулиране механизми аденин нуклеотиди под влиянието на MSM. Един възможен механизъм на действие на невротоксичен IMS е механизмът на инхибиране на активния транспорт на натриеви и калиеви йони през клетъчната мембрана елементи тъканите на ЦНС.

Целта на това изследване беше изследването на специфичността на спектъра на средно-масови молекули и честотата на антителата към нативна и денатурирана ДНК при пациенти с различни видове множествена склероза.

Материали и методи на изследване

С помощта на диагностичните критерии на McDonald [12] направи подробно клинично и лабораторно изследване на 65 пациенти с потвърдена диагноза на множествена склероза, която се проведе курс на лечение в неврологично клиниката на държавен медицински университет сибирски (Томск) или състоящи се от амбулаторни записи. Като контролна група за лабораторни изследвания бяха изследвани 27 здрави индивида, съответстващи на пола и възрастта на изследваните пациенти. Проучването е проведено в съответствие с биоетичните норми съгласно протокола, одобрен от местната биоетична комисия. Средната възраст на пациентите по време на изследването е 35.7 години (от 16 до 58 години), средната възраст на настъпване на болестта 29,50 (12-47) години, както и продължителността на заболяването 10,35 ± 7,19 години (от 1 година, за да 19 години ). Жените съставляват 61,12% от всички пациенти (39 души), мъжете - 38,88% (23 души).

Интензитет неврологични дефицити оценени от функционален Kurtzke везни [11] с определението на оценките сумата на неврологичен дефицит (FS) и степента на увреждане (EDSS). скорост прогресия се определя като отношение на продължителността на EDSS оценка на заболяването при пациенти с MS, тя има стойност от 0,79 ± 0,01 (0,25-1,86) (р = 0.002).

В 39 (58.06%) пациенти са диагностицирани с типа ремитираща заболяване (РРС), 19 (30.62%) - вторично прогресираща (ВПМС), 7 (11.29%) - първично прогресираща (АРР) до.

Серумна периферна кръв на пациенти беше използвана като материал за лабораторни изследвания. ендогенни интоксикация параметри се оценяват от серум скрининг метод спектър средно молекулно тегло [8], в тази модификация [7]. Принципът на този метод се базира на освобождаването на серум, съдържаща се в него макромолекулни пептиди и протеини с трихлороцетна киселина и количествено определяне на получената супернатанта след центрофугиране ниво NSR чрез абсорбция в монохроматичен светлинен поток при дължини на вълните от 280, 254, 230 нм. Резултатите се изразяват чрез оптична абсорбция. При дължина на вълната 280 nm (единица280) фракцията на MSM280, съдържащи ароматни аминокиселини; при 254 nm (блок254) - фракцията на MSM254, несъдържащи аминокиселини - продукти на непълно гниене на протеини, които имат токсичен ефект; при 230 nm (блок230) - фракцията на MSM230, свързани с остатъците от нуклеинови киселини.

За определяне на IgG-свързани имуносорбентни антитела към едноверижна и двойно-верижна ДНК в серума при използване на тестова система "Vekto-едноверижна ДНК-IgG» и «Vekto-двДНК-IgG» произведени от ЗАО "Вектор-Best" (на руски). Относителното съдържание на анти-ДНК AT в тестовите проби се изразява по отношение на оптична абсорбция при 450 nm (единица А450).

Статистическият анализ и обработката на данните бяха извършени с помощта на софтуера Statistica, версия 6.0 за Windows (StatSoft, Inc., 2001). Надеждността на разликите се определя от Student's t-тест и с използване на непараметричния Mann-Whitney критерий за независими проби. Разликите се считаха за статистически значими при постигнатото ниво на значимост R 0.05

Антитела към денатурирана ДНК (системен лупус еритематозус)

Метод на изследване: МХП.

биоматериал: кръв (серум).

Антитела към денатурирана ДНК (системен лупус еритематозус) Маркер на системния лупус еритематозус.

Антитела към ДНК се разделят на два основни типа: антитела, които реагират с двойно спирални (природна) ДНК (двДНК) и антитела, реактивни с единична (денатуриран) ДНК (едноверижна ДНК). Антитела срещу двДНК са по-специфични за диагностика на системен лупус еритематозус (SLE) от антитела към едноверижна ДНК, които съществуват в серуми от пациенти с други ревматични заболявания и нямат значителен диагностична стойност.

Антитела към денатурирана ДНК са включени в патогенезата на увреждането на бъбреците при лупусния нефрит, така че тестът е широко използван за диагностициране на дискоиден лупус еритематозус.

Не се изисква специално обучение. Препоръчва се кръвта да се вземе не по-рано от 4 часа след последното хранене.

Антитела към двойноверижна ДНК (анти-dsDNA), скрининг

Антитяло към двойноверижна ДНК - автоантитела, насочени срещу неговата двойна верига ДНК, наблюдавано при системен лупус еритематозус. Проучени са за диагностика, оценка на активността и контрол на лечението на това заболяване.

Руски синоними

Антитела към двойноверижна ДНК, антитела към нативна ДНК, анти-ДНК.

Български синоними

Антитяло към ds-ДНК, нативна двойно-верижна ДНК, анти-ДНК, двуверижно ДНК антитяло.

Метод на изследване

Имуноензимен анализ (ELISA).

Мерни единици

IU / ml (международна единица на милилитър).

Какъв биоматериал може да се използва за изследване?

Как да се подготвим правилно за проучването?

Не пушете в продължение на 30 минути, преди да дарите кръв.

Обща информация за проучването

Антителата към двойноверижна ДНК (анти-dsDNA) принадлежат към групата на антинуклеарни антитела, т.е. автоантитела, насочени срещу компонентите на собствените си ядра. Докато антинуклеарните антитела са характерни за много заболявания от групата на дифузните заболявания на съединителната тъкан, анти-dsDNA се счита за специфична за системния лупус еритематозус (SLE). Откриването на анти-dsDNA е един от критериите за диагностициране на СЛЕ.

Откриването на анти-dsDNA може да се направи с ензимен имуноанализ. Висока чувствителност (около 100%) от този тест е необходима за изследване на проби с малък брой антитела. Имайки предвид, че в серума на пациенти със системни заболявания на съединителната тъкан в същото време може да бъде няколко разновидности на автоантитела, и факта, че често диференциалната диагноза на тези заболявания се основава точно на идентифицирането на определен тип антитяло, изборът на лабораторен тест е изключително важно да се вземе предвид високата специфичност. Специфичността на анализа на анти-dsDNA е 99,2%, което прави това изследване незаменимо за диференциалната диагноза на СЛЕ.

Анти-dsDNA се открива при 50-70% от пациентите по време на диагностицирането на СЛЕ. Смята се, че имунните комплекси, състоящи се от двойноверижна ДНК и специфичните тях антитела (имуноглобулини IgG и IgM), които участват в развитието и да причини mikrovaskulitov характерните симптоми на SLE под формата на лезия на кожата, бъбреците, ставите, както и много други органи. Анти-двДНК е толкова типичен за SLE, които могат да се диагностицира болестта дори и с отрицателен резултат на скринингов тест за антинуклеарни антитела. Трябва да се отбележи обаче, че липсата на анти-dsDNA не изключва наличието на СЛЕ.

Откриване на анти-двойноверижна ДНК при пациенти без клинични симптоми и други критерии на заболяването не се лекува в полза на диагнозата "СЛЕ", но тези пациенти са изложени на риск от SLE в бъдеще и трябва да се следват на ревматолог, тъй като появата на анти-двойноверижна ДНК може да бъде предшествано от появата на болест в продължение на няколко години.

Концентрацията на анти-dsDNA варира в зависимост от характеристиките на хода на заболяването. Като правило високият показател показва висока активност на СЛЕ и нисък - за постигане на ремисия на заболяването. Следователно, измерването на концентрацията на анти-dsDNA се използва за контролиране на лечението и прогнозата на заболяването. Увеличаването на концентрацията показва недостатъчен контрол на заболяването, неговата прогресия, както и възможността за развитие на луфурен нефрит. Обратно, постоянно ниската концентрация на антитела е добър прогностичен знак. Трябва да се отбележи, че тази зависимост не се наблюдава във всички случаи. Нивото на анти-дсДНК са измерени редовно, на всеки 3-6 месеца, в случай на лека SLE и по-чести интервали при липса на контрол върху заболяването, изборът на терапия, на фона на бременност или следродовия период.

Специален клиничен синдром е лекарственият лупус. Въпреки значително сходство на клиничната картина на състоянието на SLE, наркотици лупус има редица разлики: провокирано от прием на лекарства (прокаинамид, хидралазин, пропилтиоурацил, хлорпромазин, литий, и т.н.) и преминава напълно след оттеглянето си, по-рядко включва вътрешни органи и следователно има благоприятна прогноза и също по-рядко комбинирана с наличието на анти-dsDNA. Следователно, когато отрицателен резултат от анализа за анти-двДНК при пациенти с клинични симптоми на автоимунно лупус и наличието на антинуклеарни фактор трябва да изключва доза еритематозус.

Въпреки че най-висока анти-двДНК характерния за SLE, тяхната ниска концентрация е също така, в кръвта на пациенти с някои други дифузни заболявания на съединителната тъкан (синдром на Сьогрен, смесено заболяване на съединителната тъкан). В допълнение, тестът може да бъде положителен при пациенти с хроничен хепатит В и С, първична билиарна цироза и инфекциозна мононуклеоза.

Спектърът на автоантитела в SLE включва и други антинуклеарни (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B), антиплазмични и антифосфолипидни антитела. Откриването им в серумен пациент на пациент с клинични признаци на СЛЕ заедно с анти-dsDNA също помага при диагностицирането. В допълнение, определянето на концентрацията на анти-dsDNA трябва да се допълни с някои общи клинични анализи.

За какво се използва изследването?

  • За диагностика, оценка на активността и контрола на лечението на системен лупус еритематозус;
  • за диференциална диагноза на дифузни заболявания на съединителната тъкан.

Кога е възложено изследването?

  • В системен лупус еритематозус симптоми: треска, кожни лезии (еритема или червено пеперуда обрив по лицето, лактите гърдите), артралгия / артрит, пневмония, перикардит, епилепсия, увреждане на бъбреците;
  • когато се откриват антинуклеарни антитела в серума, особено ако се получава хомогенен или гранулиран тип имунофлуоресцентен блясък;
  • редовно, на всеки 3-6 месеца, с лека тежест на СЛЕ или по-често при отсъствие на контрол на заболяването.

Какво означават резултатите?

Концентрация: 0 - 25 IU / ml.

  • системен лупус еритематозус;
  • ефективна терапия, ремисия на системния лупус еритематозус;
  • Синдром на Sjogren;
  • смесено заболяване на съединителната тъкан;
  • хроничен хепатит В и С;
  • първична билиарна цироза;
  • инфекциозна мононуклеоза.
  • липса на системен лупус еритематозус;
  • лупус еритематозус.

Какво може да повлияе върху резултата?

  • Ефективната терапия и постигането на ремисия на заболяването са свързани с ниски нива на анти-dsDNA;
  • липса на контрол на заболяването, обостряне на заболяването, лупусен нефрит са свързани с високи нива на анти-dsDNA.

Важни бележки

  • Липсата на анти-dsDNA не изключва диагнозата "SLE".
  • Откриване на анти-двойноверижна ДНК при пациенти без клинични симптоми и други критерии на заболяването не се лекува в полза на диагнозата "СЛЕ".
  • Анти-dsDNA е специфичен маркер на SLE, но може да се наблюдава при някои други заболявания (хроничен хепатит В и С, автоимунни заболявания).

Препоръчва се също

Кой определя изследването?

Ревматолог, дерматолог, нефролог, общопрактикуващ лекар.

литература

  • Насоки за насочване и управление на системния лупус еритематозус при възрастни. Американския колеж по ревматология Ad Hoc комитет по системните насоки за еритематозния лупус. Артрит Rheum. 1999 Sep; 42 (9): 1785-96.
  • Fauci et al. Принципи на вътрешната медицина на Харисън / A. Fauci, D. Kasper, D. Longo, Е. Braunwald, S. Hauser, J. L. Jameson, J. Loscalzo; 17 ed. - Фирмите McGraw-Hill, 2008.
  • Nossent HC, Rekvig OP.Is по-близка връзка между системния лупус еритематозус и анти-двойноверижна ДНК антитела е желана и постижима цел? Arthritis Res Ther. 2005; 7 (2): 85-7. Epub 2005 Feb 10. Преглед.
  • Egner W. Използването на лабораторни тестове за диагностициране на СЛЕ. J Clin Pathol. 2000 Jun; 53 (6): 424-32. Review.
Абонирайте се за новини

Оставете Вашата електронна поща и получавайте новини, както и изключителни оферти от лабораторията KDLmed