Хепатит С вирус (HCV), антигени cor, NS3, NS4, NS5, IgG антитела

Диети

Методът на ензимния имуноанализ (ELISA)

Методът на ензимния имуноанализ е модерен метод за лабораторно изследване на кръвта за наличието в него на антитела срещу вируси и антигени на патогени на заболяването. Този метод може не само да разкрие етиологията, но и да определи етапа на заболяването. Резултатите от анализа имат качествен и количествен показател.

Какво представлява ензимният имуноанализ за:

  • кръвни тестове ( общ кръвен тест) за наличието на автоимунни заболявания в него;
  • изследване на пациента за съпътстващи симптоми;
  • възможност за изследване на хормоналния състав на кръвта;
  • търсене на антигени за инфекциозни и венерически болести;
  • търсене на антитела срещу вирусни инфекции.

Предимствата на ензимния имуноанализ са, че той гарантира висока степен на специфичност на резултатите и има висока чувствителност (над 90%) към инфекциозни агенти. ELISA е достъпен диагностичен метод, който се извършва във всеки медицински център. Също така, като използвате този метод, можете да определите не само болестта, но и да наблюдавате неговото развитие, като сравнявате количеството на протеина, произвеждан в кръвта, на различни интервали от време.

Единственият недостатък на ELISA е може би да не може да се използва за определяне на причинителя на инфекцията, но може да бъде открит само имунен отговор към този патоген.

Основните термини на ензимен имуноанализ (ELISA)

Първо, ще разгледаме някои концепции, за да разберем принципа за провеждане на лабораторно изследване.

Имунният комплекс е комплекс от антитела и антигени, присъстващи в кръвта и участващи в имунния процес.

Антигените са вещества, които са от органичен произход и се образуват в резултат на това или това заболяване в клетките на тялото. Причината за това може да бъде автоимунна или ракова болест. Също така, антигените могат да бъдат вещества от различни патогени на инфекциозни заболявания.

Слаботостта на антителата е индикатор за силата на връзката между антигена и антитялото, както и количеството на антигена, който е влязъл в контакт с антитела (имуноглобулини).
Това е много важен показател, тъй като помага да се определи датата на заразяване на лице, което е много важно за инфекцията по време на бременността.
Тестът за аритметичност се провежда в лабораторни условия чрез обработка на комплекс антитяло-антиген с урея, която разрушава протеина. В този случай съединения с ниска авидност се унищожават и съединения, които имат висока аритметичност, остават непокътнати. Резултатите от теста за авидност се изразяват като процент.

Антитела (имуноглобулини) - специален протеин, който произвежда лимфоцити, т.е. имунни клетки, когато човешкото тяло навлезе в бактерии, вируси или гъби (инфекциозен патоген).
Има пет вида имуноглобулини: A, E, M, G, D. Те се различават едно от друго по маса, форма, участие в инфекциозния процес, полуживот, времето на образуване от момента на инфекцията.
Най-голямото молекулно тегло е имуноглобулинът IgM (пентамер), тежи 950000 далтона, а останалата част има тегло в диапазона от 150 до 200 000 далтона. Поради техния размер, IgM не преминава през плацентарната бариера. В кръвния серум IgG имуноглобулините са основното тяло, като процентното им съотношение е около 80%. А най-малката част в серума е заета от IgE антитела - 0.003%. В инфекциозния процес се включват имуноглобулини IgG, IgM, IgA. Докато IgE е резултат от алергични реакции. Такива белтъци като IgD участват във формирането на локален имунитет и се образуват в лимфните възли и тонзилите.

Основи на метода на ензимния имуноанализ

Основи на метода на ензимния имуноанализ

Има няколко типа ELISA, сред които директни, индиректни, конкурентни и блокиращи. Въпреки че на практика лабораторните техници често използват хетерогенен имунен анализ в твърда фаза, наречен ELISA (ензимно свързан имуносорбентен анализ).

Принципът на ензимния имуноанализ се проявява в реакцията на антитялото и антигена, при които се образува имунният комплекс - антиген-антитяло. Тази реакция води до факта, че ензимната активност на маркерите на повърхността на антителата се променя.

За да разберете това, помислете за този процес на етапи.

Първият етап. На този етап лабораторният асистент, провеждащ изследването, поставя пречистен антиген на инфекциозния агент върху повърхността на кладенците на плочата. След това, серумът на кръвта на пациента се добавя към патогена, който провокира специфична реакция между антитялото в кръвта и антигена. Това е полученото съединение и участва в следващия етап на експеримента.

Вторият етап. Във втория етап от изследването се образуват имунни комплекси, които са реакция между получения в първия етап антиген и конюгат, т.е. имуноглобулин, белязан с пероксидазен ензим. В този случай се добавя специфичен хромоген. Реакцията дава цветно съединение в кладенче. Интензитетът на цвета зависи от броя на имуноглобулините в кръвта на пациента.

Третият етап. В третия етап лабораторните техници обикновено оценяват резултатите от изследването. За тази цел фотометрията се извършва с помощта на спектрофотометър, сравнявайки плътността на биологичния материал с плътността на пробите, а също така се извършва и математическо изчисление на резултатите. Нивото на имуноглобулините в кръвта зависи от плътността на ямката на плаката.
На практика най-често се използват 96-ямкови плаки.

Когато се измерва оптичната плътност (съкратено IP) на кръвта, се извършва броят на антителата в една обемна единица. След това резултатът се сравнява с контролния материал.
Важно е да се помни, че за всеки метод на изследване се установяват техните показатели, с помощта на които се вземат предвид референтните стойности на теста. Това са показатели за патологии и норми. Следователно е необходимо да се помни това във всеки конкретен случай. Не можете да тълкувате резултатите от едно изследване в друго. Също така е невъзможно да се сравнят резултатите от отделните лаборатории.

Болести, идентифицирани чрез ELISA диагностика

С помощта на ензимния имуноанализ е възможно да се открие наличието на такива заболявания в организма:

1) Инфекциозни заболявания

  • човешки имунодефицитен вирус,
  • вирусен хепатит А, В, С, D, Е и други,
  • цитомегаловирусни инфекции,
  • херпес инфекции от първи и втори тип,
  • токсоплазмоза;
  • рубеола инфекция,
  • мононуклеоза, инфекция на Epstein-Barr,
  • инфекция от морбили,
  • бруцелоза,
  • pseudotuberculosis,
  • салмонелоза,
  • дизентерия или шигелоза,
  • аспергилоза
  • енцефалит,
  • паразитоза, например, ламбиоза, трихиноза, токсокароза, описторхиаза и някои други,
  • Полово предавани инфекции: сифилис, хламидия, уреаплазмоза, микоплазмоза,
  • Инфекция с Helicobacter pylori.

2) Индикатори на състоянието на човешки имунитет и маркери на автоимунни заболявания.
3) Онкологични заболявания (хроничен гонадотропин, специфичен за простатата антиген, алвеомуцин, фактор на туморна некроза, раково-ембрионален антиген и други).
4) Ендокринни заболявания.
5) Нарушения на репродуктивната система.

Списъкът не включва всички заболявания, които могат да бъдат диагностицирани с ELISA, този списък може да продължи.

изследване

Ограден материал за изследването по метода на ензимния имуноанализ.

За изследване ELISA цереброспиналната вещество може да се приема от пациенти, стъкловидното течност, амниотична течност, слуз, изолирани от шийката на матката или уретрални тампони, както добре. Но най-често срещаната проба за изследване е кръвта на пациента.

Вземането на проби от кръвта се извършва сутрин, на празен стомах. В този случай не трябва да приемате храна или лекарства. Както при всички видове терапии, които включват антибактериално лечение, лечение на вируси, паразити и други, те трябва да бъдат спрени най-малко две седмици преди началото на теста.

Резултатите от ензимния имуноанализ обикновено се правят в рамките на един ден. Забавянето не трябва да се случва, въпреки че при големи групи от серуми, лабораторните специалисти просто нямат време да направят анализа навреме.

Резултати от проучванията, използващи ензимния имуноанализ

Оценката на резултатите от проведените проучвания за откриване на всякакви инфекции, броят на откритите в кръвта имуноглобулини, както и техният външен вид са от особено значение. От тези показатели зависи наличието на инфекцията в тялото или отсъствието му. Също така, сравнявайки количествените и качествените показатели, лабораторният асистент може да определи очаквания стадий на развитие на болестта, както и да отличи острата форма на болестта от хроничната форма. Наличието на активен вирус в човешкото тяло също се оценява, което се проявява в остри или хронични остри форми на заболяването.
Приблизителното време, през което се появява появата на Ig имуноглобулини в кръвта.

Фактът е, че IgM са най-бързо откриващите се антитела. Откриването им се извършва в рамките на 1 до 3 седмици след инфекцията на тялото, което е признак за остра фаза на инфекция с човешкия вирус.

Също така, подобни антитела могат да бъдат намерени в кръвта на пациента при обостряне на хронично заболяване. Количеството антитела IgM се съхранява около 3 месеца от момента на тяхното формиране, след което постепенно започват да изчезват. Въпреки че има изключения. Например, някои пациенти след окончателното възстановяване запазват количеството антитела в кръвта си. По този начин циркулацията на имуноглобулините преминава няколко години след заразяването.

При тези пациенти е необходимо да се проверят положителните индекси за наличие на IgM антитела, тъй като има ситуации, при които системата за тестване прави грешка и дава фалшив положителен резултат. Такива ситуации често се случват при бременни жени.

Що се отнася до появата на IgA антитела, те могат да се образуват след 2 или 4 седмици след като организмът е бил изложен на инфекция. Но антителата могат да бъдат открити само след един месец. Тогава броят им достига оптималния брой, за да ги открие.

IgA антителата се произвеждат от клетки от лимфни възли, далак и лигавици. Такива имуноглобулини са способни да се концентрират върху повърхностите на лигавиците на органите, където изпълняват своята защитна функция, участвайки в местния човешки имунитет.

Появата на IgG антитела се проследява от системите за тестване още през 4-та седмица от прогресирането на инфекциозния процес в организма. Титърът на такива имуноглобулини може постепенно да се увеличи в продължение на 2 месеца. След възстановяване, малко количество от техния титър се запазва в организма и поддържа имунитета. Такива заболявания като хламидия, трихомониаза и микоплазмоза характеризира с ниски нива на IgG антитела в кръвта, поради липса на имунитет устойчиви на такива инфекции.

класове

Варианти за откриване в човешката кръв на имуноглобулини от различни класове.

  • Идентифицирането на антитела IgM, което се извършва изолирано, показва първоначалната инфекция на човек.
  • Откриването на IgM и IgG антитела в серума едновременно се наблюдава и при първичната инфекция, която се е появила през последните 2-3 месеца. Или, тази комбинация може да е признак на влошаване на хронично заболяване.
  • По този начин, такива резултати по време на бременност не винаги показват първична инфекция.
  • Откриването на изолирано антитяло от клас IgG може да бъде признак на имунитет към инфекцията, въпреки че може да показва и хронично заболяване. При наличието на хронична форма на заболяването, важна роля играят броят на антителата и тяхната динамика. Такива изследвания се провеждат на интервали от приблизително 2 седмици.
  • Когато IgA и IgM антителата са налични в кръвта незабавно, това може да означава първична инфекция. Откриването на IgA в изолация също е следствие от първична инфекция с организъм.

Когато се откриват IgA антитела заедно с IgG антитела, е показано активиране на хроничната форма на инфекция. Имуноглобулините се появяват в кръвта 2 седмици след влошаването на заболяването.
Слабостта на антителата е индикация за силата на връзката между антигена и антитялото, както и количеството на антигена, който е влязъл в контакт с антитела (имуноглобулини). Това е допълнителна стъпка в диагностиката на ELISA.

Това е много важен показател, тъй като помага да се определи датата на заразяване на лице, което е много важно за инфекцията по време на бременността. Освен това можете да прецените всички рискове от вътрематочна инфекция на детето.

Тестът за аритметичност се провежда в лабораторни условия чрез обработка на комплекс антитяло-антиген с урея, която разрушава протеина. В този случай съединения с ниска авидност се унищожават и съединения, които имат висока аритметичност, остават непокътнати. Резултатите от теста за авидност се изразяват като процент. Високата авидност на антителата показва хронична форма на заболяването или е признак на персистиращ имунитет.

Характеристики на появата на антитела в кръвта на кърмачетата

Ако при деца на възраст под една година или до 1,5 години в кръвта има майчин IgG, това означава, че антителата проникнали през тялото на бебето през плацентата по време на фетацията. Този знак не може да показва инфекцията на бебето, но се предава от имунитета на майката до инфекцията.

Но ако имуноглобулините от клас IgM се намират в малък организъм, който поради тяхното тегло не може да проникне през бебето през плацентата, това е признак на инфекция. Инфекцията може да се появи след раждане или по време на вътрематочно развитие.

Количествен метод на ензимен имуноанализ.

Резултатът от диагностицирането на заболявания по метода ELISA е представен в някои измервателни единици:

  1. ОП - оптичната плътност на пробата е нивото на концентрацията на антитялото в една единица обем. Колкото по-висока е тази стойност, толкова повече имуноглобулини се намират в кръвта.
  2. Някои резултати от ELISA означават наличието на такава единица като коефициент на положителност - CP. Това също е обозначение на плътността на пробата.
  3. Единици на концентрация на имуноглобулин се изразяват в нанограми, милилитри или в ng / ml.
  4. Титрите на кръвните серуми се изразяват както следва: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 и други подобни.
  5. Титрите, при които диагнозата е диагностицирана за различни инфекции, са различни.
  6. В резултатите от проучването има такива символи: "-", "+", "?" (+, ++, +++, ++++).
  7. Качествената оценка означава, че има само една точка от две: положителна или отрицателна.

Правилното тълкуване на резултатите от това проучване зависи от квалификацията на лекаря, тъй като в допълнение към специалиста никой няма право да предпише лечение.

Експерти оценяват броя на антителата в кръвта, техния външен вид и концентрация.

Също така не забравяйте, че не можете да сравнявате резултатите от различните методи на изследване или резултатите от тестовете, получени в различни лаборатории. Тъй като за всеки диагностичен метод има индикатори и измервателни единици.

Сравнението на резултатите е възможно само в рамките на една и съща лаборатория.

Видео на ензимния имуноанализен метод ELISA

Имуноензимен анализ на кръвта

Имуноензимният анализ на кръвта е високоефективен и модерен метод за клинична диагностика на редица заболявания. Същността на тази техника е да се идентифицира активността на определени антитела. ELISA кръвта се използва не само за определяне на съществуващите патологии на човешкото тяло, но и в хода на експерименталните изследвания, където се изисква специална точност при определяне на процентните концентрации на съединенията в биологичния материал.

Принцип на диагностика

Имуноензимен анализ е откриването на специфични антитела чрез биохимични реакции. Ако човек се разболее и влезе в тялото си чужд агент (антиген), имунната система започва активно да развива специфични протеини или антитела, които разрушават антигените. В резултат на тяхното "сблъскване" антиген-антитяло се образуват съединения.

Това е техният количествен и качествен анализ, изпратен до имунозимни изследвания. Например, ако по време на диагнозата трябва да идентифицирате конкретен вирус в кръвния биоматериал на пациента, към него се добавят антитела, които се считат за специфични за вируса.

И обратното, реакцията на IFA за откриване на антитела се състои в въвеждането на определени антигени в кръвни проби. Специални реагенти ELISA се използват за диагностика, за да се направи биохимична реакция по-ясно.

Човешкото тяло също се характеризира с неспецифични отбранителни фактори. Неспецифичните антитела са протеини, които действат фатално за голям брой вредни микроорганизми. Те не се използват при теста ELISA.

Индикации за провеждане

Изследването на IFA се извършва по препоръка на лекарите в следните случаи:

  • Определяне на патологии на инфекциозна природа, които влизат в тялото на пациента главно чрез полов акт. Точна диагноза на инфекции като уреаплазмоза, трихомониаза или микоплазмоза.
  • Анализ на хормоните в серума. Най-често тестовете определят тестостерон, прогестерон, тироид стимулиращ хормон, пролактин. Това важи и за диагностицирането на заболявания на ендокринната система.
  • Идентификация на маркери с онкологичен тип.
  • Идентифициране на различни съединения и установяване на причината за интоксикация с хора със змийско ухапване или отравяне.
  • Диагностика на инфекциозни заболявания, локализирани в различни органи и системи на тялото, установяващи тежестта и стадиите на патологичния процес. Анализът на ELISA определя такива заболявания като ХИВ, вирусен хепатит на всички групи, морбили, рубеола, Helicobacter pylori инфекция.

Опции за провеждане

В съвременната медицина, ензимният имуноанализ се използва в две версии: твърда фаза и хистохимична реакция. Последният вариант се използва много рядко при диагностициране. Материалът за изследването в този случай може да бъде тест ELISA, група клетки, части от парафин или отпечатъка на диагностицираните органи.

Твърдата фаза ELISA е метод за анализ, при който един от включените компоненти (или антитяло или антиген) е фиксиран върху специален твърд носител. Те могат да бъдат топки, микро панели или полистиролови пръчки. Този имунохимичен метод е гаранция за идентифициране и откриване на антиген. По време на диагностиката също така ще бъде възможно да се идентифицират характерните антитела и да се изолира техният титър в кръвния серум.

Има директен и косвен метод на изследване в твърда фаза. За да се идентифицират антигените в лабораторията, използвайте директен метод, който също така има и името на сандвич метод. За неговото прилагане се вземат антитела, специфични за антигена, който трябва да бъде открит. Те се поставят в ямките на микро панела, където самият антиген е представен по-късно. Съдържанието се загрява до 37 ° С и да престои известно време до самото въвеждане на ензим-белязани антитела.

Добавянето на разтвор на сярна киселина предизвиква химическа реакция. Ако резултатът е положителен, пробите ще станат оранжеви или жълти. Анализът за наличието на антитела и определянето на техния титър се осъществява чрез индиректен ELISA в твърда фаза.

Видове имуноглобулини, които определят анализа

Класификацията се състои от 5 основни типа човешки имуноглобулини: IgA, IgG, IgE, IgM и IgD. За лекарството от голямо практическо значение са само няколко от тях (A, G, М).Immunoglobulin клас А (или IgA) изпълнява функция на защита срещу мукозни инфекции, стомашно-чревна система, пикочните пътища и дихателната система. В началото на болестта не е възможно да се идентифицират тези имунни комплекси, те се проявяват само на втората седмица или по-късно.

Имуноглобулините IgM характеризират острата фаза на патологичния процес в организма. Те вече могат да бъдат идентифицирани в кръвта на 5-ия ден на заболяването. Анализът на ELISA по време на бременност в някои случаи дава преценен IgM, което не винаги е индикатор за инфекция.

Имуноглобулините от клас G (или IgG) разкриват остатъчния имунен процес. Първата им поява в кръвната проба е 5-6 седмично заболяване. Тогава IgG може да присъства през целия живот на пациента, като го предпазва от повторение на заболяването и дори напълно елиминира вторичното развитие на патологиите. Когато се идентифицират маркерите на имунната система и автоимунните патологични процеси, стойностите на IgG се различават по природа. Например, Igg от IgG4 характеризиращ се с това, че първият общия имуноглобулин, а вторият - sekretornyy.IgE използва само в проучвания паразитология.

Имуноглобулиновият IgD се локализира в лимфоцитите. В малка концентрация може да се намери в кръвта на всеки здрав човек. Количеството на този компонент се увеличава драстично по време на детето, така че анализът на ELISA по време на бременност има някои отклонения. IgD е повишен при пациенти с астма и хора с имунен дефицит.

Провеждане на диагностика

Материалът за ELISA е венозна кръв, която се взема от улналната вена на пациента. Препоръчваният обем е 5-10 ml. След като материалът бъде взет, той се изпраща в диагностична лаборатория.

Ако всички правила са изпълнени, резултатът ще бъде осигурен на следващия ден.

За да бъде резултатът от ELISA надежден, лекарите силно препоръчват следните правила за обучение:

  1. За да се премине или да се проведе анализът на IFA, той се разрешава само на празен стомах.
  2. последното хранене трябва да се случи няколко часа преди лягане (изключва мастни, пушени и месни продукти).
  3. няколко дни преди посещението в лабораторията трябва да спрете да приемате наркотици.
  4. преди процедурата не можете да пушите или да пиете алкохол.
  5. В навечерието на предаването на кръвта е забранено да отслабва тялото с физическо натоварване.

Дешифриране на резултатите от качествен метод ELISA

В отговор на ELISA по качествен метод са възможни два вида резултати:

  • отрицателен означава, че антителата в събраната част от кръвта не се откриват (липса на инфекциозен процес);
  • положителна - показва откриването на антитела (има голяма вероятност за патологично заболяване, причинено от инфекциозен агент).

Ако изследването на пробата показа отрицателна стойност на имуноглобулините от групи M, G и А, тогава можем да кажем или за липсата на заболяването, или за началния етап на неговото развитие. Същият резултат се получава при пациенти с окончателно възстановяване, когато е изминало значително време.

Повишена положителен IgM титър при стойности IgA и IgG със знака "-" показва настъпване на острата фаза на инфекция пациент neduga.Esli резултат показва положителни стойности на всички три типа имуноглобулин (М, G и А), това показва, повтаряне на инфекциозно заболяване, който е в остра или хронична фаза на развитие.

Дешифриране на резултатите от количествения метод ELISA

Количественият метод определя концентрациите на търсените вещества в кръвната проба. Резултатът може да бъде изразен в следните единици:

  1. ОП - единиците за измерване на оптичната плътност характеризират нивото на концентрацията на антителата на единица обем. Колкото по-високо е, толкова повече имуноглобулини в биоматериалите.
  2. Някои от приложените методологии ELISA предполагат наличието на такъв показател като индекса на позитивност в анализа. Коефициентът на позитивност е означение, аналогично на плътността на пробата.
  3. Параметрите на концентрацията на антителата се изразяват в милилитри, нанограми (или ng / ml).
  4. Във формата на присъстващите знаци: "-", "+", "?" (+, ++, +++ и др.).

Не забравяйте, че се направи надеждна оценка на размера на имуноглобулини и е установено, окончателна диагноза може да се преживее само vrach.Kazhdaya тестова система има свои референтни граници. Вариантите на нормата и вариантите на патологичните отклонения са различни за тях.

Предимствата на метода

  • Удобство и бързина на биохимичните реакции за диагностика;
  • Висока степен на точност и чувствителност на метода (не по-малко от 90%);
  • Възможност за провеждане на диагностика дори на най-ранен стадий на развитие на патологични процеси;
  • Размерът на разходите за диагностичната процедура го прави достъпна за обществеността;
  • Способността да се наблюдава динамиката на инфекциозния процес;
  • Абсолютна безопасност и относителна безболезност;
  • За да се получи надежден резултат, е достатъчен минималният обем материал за изследване;
  • Формулярът с отговора ще бъде получен възможно най-скоро;
  • Има възможност за частична или пълна автоматизация на процеса (пълен цикъл на ELISA извършва анализатор лазурит).

Единственият недостатък е, че ELISA се отнася до индиректни видове диагноза.

Това означава, че е възможно да се определи само имунната реакция на човешкото тяло на присъствието на патогена, а не на самия патоген.